实验六 细菌的敏感试验

一、实验目的要求

⑴熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判定方法。

⑵了解最低抑菌浓度试验的原理和方法。

⑶解药敏试验在实际生产中的重要意义。

二、实验用品  

隔水式恒温培养箱、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、天平、接种环、酒精灯、精密pH试纸、试管架、火柴、菌种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、药敏试纸青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶等，分装于灭菌平皿中、95%酒精缸、小镊子、普通琼脂平板。

三、实验方法及步骤

    1．圆纸片扩散试验

    操作方法 取一菌种，用灭菌接种环致密划线于琼脂平板表面（可重复来回划线），或用“十”字形划线法。用无菌镊子将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于培养基表面，各片距离要相等（图8-1）。37℃培养24h观察结果。

    结果判定 根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小（图8-2），来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感四种。

    细菌对磺胺药物敏感度的标准，按Hawking所定，若磺胺药物浓度在每毫升10μg即能抑制细菌生长者，则该菌对磺胺药很敏感；如需每毫升50μg才能抑制生长，为敏感；每毫升1000μg始能抑制，为中度敏感；每毫升超过1000μg仍不能抑菌者，则该菌系耐药性菌株。细菌对不同抗生素的敏感度标准，参阅表8-1。

     2．最低抑菌浓度试验

    原理 将抗菌药物作倍比稀释，在不同浓度的稀释管内接种被检细菌，定量测定抗菌药物的最低浓度。本结论可作为其他药物敏感性试验的标准方法。

    实验材料

    菌种：金黄色葡萄球菌肉汤培养物

    培养基：普通肉汤每管1ml

    抗菌药物：含青霉素64IU/ ml的普通肉汤各一管，每管2ml。

    其他材料：麦氏比浊管，灭菌1ml刻度吸管，橡皮胶头。

 

    操作程序以葡萄球菌对青霉素的敏感性为例。将1ml/管的试验排成一列，编上1-9的管号，在第1管内加入含64IU/ml青霉素肉汤1ml，混匀后吸取1ml到第2管，混匀，再取1ml至第3管，依次类推到第8管。第9管不含青霉素的肉汤作对照管，然后每管加入0.1ml含菌量相当于麦氏比浊管第1管1/2的金黄色葡萄球菌（相当于1.5亿/ml）。

 结果判定以能抑制细菌生长的抗生素的最高稀释度作为抗生素的最低抑菌浓度。

四、作业

    1．圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？

    2．试述药敏试验的意义。