第四节 核酸的理化性质（20min）

一、紫外吸收性质

核苷酸在 260nm 处有特征性的吸收峰，核苷酸的紫外吸收来源于碱基

A260nm可作为紫外定量核酸的依据。

实验中常以A260 =1.0对应于50μg/ml 双链 DNA，或40μg/ml 单链DNA或者RNA，或20μg/ml寡核苷酸为标准定量溶液中的核酸含量。利用260nm与280nm的吸光度比值（A260 /A280）还可以判断从生物样品中提取的核酸样品的纯度。

二、DNA的变性、复性与杂交

1.DNA的变性与增色效应

DNA的变性（Denature）：在某些理化因素作用下，DNA双链间氢键断裂，DNA 双螺旋破坏，解链成两条单链的过程。

· 破坏氢键与碱基堆砌力的因素均能造成变性

· 变性DNA一级结构不发生改变

变性DNA碱基暴露，紫外吸收增加的现象称为增色效应(hyperchromic effect)，测定紫外吸收的变化可作为 DNA变性程度的衡量指标。

解链温度(melting temperature，Tm) ，DNA 50％ 变性时的温度。Tm 与 DNA 的长度及 GC 含量相关。Tm＝69.3＋0.41×(G＋C)％

2.DNA的复性与减色效应

复性(renature)：变性的 DNA 单链相互识别并结合，恢复其天然双螺旋结构的过程。也称退火(annealing)

DNA复性时，其溶液A260降低的现象称为碱色效应(hypochromic effect)

3.分子杂交（hybridization）

不同来源的核酸，在同一体系中进行变性与复性处理，只要核酸单链存在一定的互补性，就可以结合成杂化分子。

· DNA-DNA 杂交

· RNA-RNA 杂交

· DNA-RNA 杂交

核酸分子杂交是一项被广泛地应用在分子生物学和医学中的技术，Southern印迹、Northern印迹、斑点印迹、原位杂交、PCR扩增、基因芯片等核酸检测方法都利用了核酸分子杂交的原理。

重点内容：DNA的变性、Tm、高色效应、复性与分子杂交。

难点内容：DNA复性与分子杂交技术。

本节研究进展：分子杂交技术的拓展和应用