第四节   种子生活力的测定

任务分析

1. 知识目标

掌握种子生活力测定的意义及方法。

2. 技能目标

掌握氯化三苯基四氮唑（TTC）法与红墨水（酸性大红Ｇ）染色法测定种子生活力。

课程导入：

种子生活力是指种子发芽的潜在能力。种子生活力测定在农业生产上具有重要的意义。

课程学习：

一、测定种子生活力的意义

1. 测定休眠种子的生活力。

许多植物种子因存在休眠，暂时不能萌发，因此发芽率很低，尤其是新收获的和野生性较强的种子，必须进行生活力测定，才能了解种子的发芽潜力，以便合理利用种子。播种前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理。种子检验时，若发芽试验末期有新鲜不发芽种子或硬实种子，也应接着进行生活力测定，以正确评定种子品质。

2. 快速预测种子的发芽力。

休眠种子可借助于各种处理措施打破休眠，然后进行发芽试验，但所需时间较长。而种子贸易中，有时因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需时间更长，如小麦需8d，水稻需14d，某些蔬菜和牧草种子需2～3周，而多数林木种子则需要更长的时间。在这种情况下，可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考。

二、测定种子生活力方法

（一）氯化三苯基四氮唑（TTC）法

1. 原理

测定的原理 TTC又叫红四氮唑,全名2,3,5,—氯代三苯基四氮唑,为白色至黄白色粉末,是一种氧化还原剂,易溶于水,更易溶于醇等有机溶剂.其染色原理是:TTC在有生活力种子胚组织活细胞中脱氢酶的作用下,被还原成红色稳定的2,3,5——三苯基甲脂(TTCH),而无生活力的种子就没有这种反应,从而区别出种子有无生活力。

2. 仪器与用具

培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。

3. 试剂

TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

4. 方法

（1）将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。

（2）随机数取4份，每份50粒种子。沿种胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要完整的暴露在切面上），置于编号的培养皿中备用。

（3）培养皿中加TTC溶液，以浸没种子为度。

（4）放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min。

（5）保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入如下表内。

TTC染色法测定种子生活力记载表

（6）计算结果

测定结果以有生活力种子的百分率表示，分别计算各个重复的百分率，查表比较重复间最大差距是否在最大容许差距内。如果各重复中最大值与最小值没有超过容许 误差范围，就用各重复的平均数作为该次测定的生活力。计算结果按GB/T 8170修约至整数，在质量检验证书上填报；否则，重新测定生活力。

5. 注意事项

（1）TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

（2）染色温度一般以25～35℃为宜。

（3）判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。

（4）判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。

（5）不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入如下表。

TTC法测定主要作物种子生活力要点

（二）红墨水（酸性大红Ｇ）染色法

1. 原理

有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。

2. 仪器与用具

与TTC法相同。

3. 试剂

红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。

4. 方法

（1）先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子。

（2）随机数取4份，每份50粒种子。沿种胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要完整的暴露在切面上），置于编号的培养皿中备用。

（3）培养皿中加入红墨水溶液，以浸没种子为度。

（4）染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子， 直到所染颜色不再洗出为止。

（5）对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表1（同TTC法）。

（6）计算结果4组平均生活力保留整数。

课堂检测

课后总结

总结种子生活力测定过程的注意事项。

课后实践

以玉米种子为例，试述种子生活力测定的程序。