大肠杆菌中的基因表达
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一、包涵体形成的原因
包涵体形成的原因主要是高水平表达的结果。
包涵体虽然由无活性的蛋白组成,但包涵体形成对于重组蛋白的生产也提供了几个优势:
1.包涵体具有高密度,易于分离纯化;
2.重组蛋白以包涵体的形式存在有效地抵御了大肠杆菌中的蛋白酶对目的蛋白的降解;
3.对于生产那些处于天然构象时对宿主细跑有毒害的蛋白时,包涵体形成无疑是最佳选择。
二、包涵体的分离和溶解
1.包涵体的分离
2.包涵体的溶解
三、包涵体蛋白复性方法
一个有效的、理想的折叠复性方法应具备以下几个特点:
① 活性蛋白质的回收率高;
② 正确复性的产物易于与错误折叠蛋白质分离;
③ 折叠复性后应得到浓度较高的蛋白质产品;
④ 折叠复性方法易于放大;
⑤ 复性过程耗时较少。
1.稀释、透析复性法
2.含二硫键的蛋白的复性
3.封闭蛋白的疏水簇促进复性
4.凝胶过滤层析复性
5.小分子添加剂促进的复性
6.分子伴侣或折叠酶促进的复性
7.人工分子伴侣促进的复性
(美)那伊,(美)阿凯尔斯主编,童望宇等译. 蛋白质药物:开发与生产. 化学工业出版社, 2006

