l 学习重点

1. 掌握SDS-PAGE分离蛋白质的原理和操作。

2. 学习通过SDS-PAGE计算蛋白质相对分子质量的方法。

l 知识要点

1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：是蛋白质电泳的主要方法。聚丙烯酰胺是由丙烯酰

胺单体（Acr）和交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在自由基的引发下，聚合成网状立

体结构凝胶。利用PAGE 的分子筛效应和电荷效应，将蛋白质根据分子大小、形状和电荷差

异进行分离。

2. 十二烷基硫酸钠（SDS）：是一种阴离子去污剂，可以按一定比例与蛋白质分子结合，

让蛋白质带上大量负电荷。这些负电荷消除了不同蛋白质原有的电荷差异，同时蛋白质分子

充分解聚成单体。在SDS-PAGE 中，蛋白质的迁移率只取决于分子大小，而与电荷及分子

形状无关。

3. SDS-PAGE 测定蛋白质相对分子质量：当分子量在15KD-200KD之间时，蛋白质的

迁移率和分子量的对数呈线性关系。将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，

可获得一条标准曲线。未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准

曲线上求得分子量。

l 试剂

1. 30% Acr-Bis 储备液（29:1）。

2. pH8.8 1.5mol/L Tris-HCl 缓冲液。

3. pH6.8 0.5 mol/L Tris-HCl 缓冲液。

4. 10% SDS 溶液。

5. pH8.3 Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

6. 考马斯亮蓝R250染色液。

7. 脱色液：乙酸:甲醇:水（V/V/V）=10:50:40。

8. 10%过硫酸铵。

9. TEMED。

10. SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液（5×）。

11. 样品蛋白溶液（0.25mg/ml）。

12. 预染蛋白分子量Marker。

l 仪器

直流稳压电泳仪、垂直电泳槽（1 套）、电磁炉、电磁炉锅、脱色摇床、微量取液器

l 操作

l 注意事项

1. 制胶时应注意制胶板是否有渗漏现象。

2. 根据分离对象的分子量选择合适的凝胶孔径。

3. TEMED会促进丙烯酰胺快速聚合，配制分离胶和浓缩胶时需要快速混匀并灌注。