• 学习重点

  学习凝胶层析技术的基本原理和操作。

  掌握根据分离对象的性质差异进行实验条件的选择和设计。

• 知识要点

1.  不同的蛋白质的分子量、溶解度、以及在一定条件下带电的情况有所不同，可以根据这些性质的差别，提纯各种蛋白质。

2. 层析技术是一类物理分离方法,根据待分离混合物中各组分物理化学性质的差别,使各组分不同程度分布在固定相和流动相中,由于各组分随流动相前进的速度不同,从而得到有效分离。

3. 凝胶层析是依据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。

4. 凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，单个凝胶珠本身象个"筛子"。凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。不同类型凝胶的筛孔的大小不同。 

5.  当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。

  l  试剂

    SepadexG－25

  纳氏试剂

  双缩脲试剂

  l  仪器

  层析柱、层析柱支架台、螺旋夹

• 操作

• 注意事项

• 透析时，检测带外溶液一定要颜色很深时才能换水。

• 层析加样时动作缓慢轻柔，不要破坏凝胶层表面的平整。

• 柱床面保持有缓冲液。