第24章 常用分子生物学技术的原理及其应用
一、掌握
1.分子杂交与印迹技术的原理及应用。
2.PCR技术的原理及应用。
二、熟悉
1.DNA印迹、RNA印迹、蛋白质印迹的原理。
2.逆转录PCR、原位PCR、实时PCR技术的基本原理。
3.基因文库的概念、种类及作用。
4.分离、纯化蛋白质的一般原理和方法。
一、单项选择题(只有一个是正确的)
1.“SourthernBlotting”指的是
A.将DNA转移到膜上,用DNA做探针杂交 B.将RNA转移到膜上,用DNA做探针杂交
C.将DNA转移到膜上,用蛋白质做探针杂交 D.将RNA转移到膜上,用RNA做探针杂交
E.将DNA转移到膜上,用RNA做探针杂交
2.分子杂交试验不能用于
A.单链DNA分子之间的杂交 B.单链DNA与RNA分子之间的杂交
C.抗原与抗体分子之间的结合 D.双链DNA与RNA分子之间的杂交
E.RNA与RNA之间的杂交
3.探针是经过什么标记的核酸分子
A.用放射性同位素标记 B.用生物素标记 C.用地高辛标记
D.A、B、C都对 E.用抗体标记
4.下列哪一条在分子印迹技术中不适用
A.DNA向NC膜转移 B.蛋白质向PVDF膜转移 C.DNA向尼龙膜转移
D.RNA向NC膜转移 E.蛋白质向一号滤纸转移
5.用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条
A.必须是双链DNA B.必须是双链RNA C.必须是单链DNA
D.必须是100bp以上的大分子DNA E.必须是蛋白质
6.免疫印迹技术中不适合应用的步骤是
A.聚丙烯酸胺凝胶电泳 B.用NC膜或PVDF膜 C.靠毛细管作用进行转移
D.用同位素标记抗体 E.用非同位素标记抗体
7.原位杂交是指
A.在NC膜上进行杂交操作 B.在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作
C.直接将核酸点在NC膜上的杂交 D.在PVDF膜上进行杂交操作 E.在凝胶电泳中进行的杂交
8.有关DNA链末端终止法的不正确说法是
A.需要ddNMP B.需要ddNTP C.dNTP:ddNTP的比例要合适
D.需要放射性同位素或荧光染料 E.需要dNTP
9.有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是
A.用荧光代替了同位素标记 B.激光扫描分析代替人工读序
C.基本原理与手工测序相同 D.不再需要引物 E.需要与手工序列分析相同的模板
10.免疫印迹技术指的是
A.结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合 B.结合在膜上的DNA分子与抗体结合
C.结合在膜上的RNA分子与抗体结合 D.结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合
E.结合在膜上的免疫分子与DNA的结合
11.同位素标记探针检测NC膜上的RNA分子叫做
A.Northern Blotting B.Southern Blotting C.Western Blotting
D.蛋白分子杂交 E.免疫印迹杂交
12.用做探针的DNA分子必须
A.在杂交前变性 B.在杂交前复性 C.长于30个核苷酸 D.短于30个核苷酸 E.是双链分子
二、填空题
1.只要DNA或RNA的单链分子之间存在着一定程度的______,就可以在不同的分子间形成______。
碱基配对关系,杂化双链
2.存在于NC膜上的生物分子可以放到杂交液中,与__________ 进行__________ 。
探针,杂交反应检测
3.Southern blotting主要用于__________的分析,也可以用于__________ 。
基因组DNA,重组质粒和噬菌体
4.蛋白质的印迹分析,也称为__________ 或__________。
免疫印迹技术,Western blotting
三、名词解释
1.DNA印迹技术 :
也称为Southern blotting,是将基因组DNA经限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳,再利用毛细作用将胶中的DNA分子转移到NC膜上进行杂交反应的技术。主要用于基因组DNA的分析。
2.RNA印迹技术
称为Northern blotting,指RNA经电泳分离后转移至膜性支持物上用于杂交反应的技术,目前主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平以及比较不同组织和细胞的同一基因的表达情况。
3.蛋白质印迹技术
也称为Western blotting或免疫印迹技术,指蛋白质在电泳分离之后转移到NC膜上,再与溶液中的其它蛋白探针相互结合的技术。免疫印迹技术在检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白分子间的相互作用研究中都有广泛的作用。
4.探针(probe )
用同位素、生物素或荧光染料标记DNA分子的末端或全链的一段多聚核苷酸可以称为探针,用于与已经用印迹技术固定在NC膜上的DNA或RNA进行结合反应。蛋白质的检测常用抗体作为探针。
5.逆转录PCR技术
将RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。即首先以RNA为模板,在逆转录酶的作用下合成cDNA,再以cDNA为模板通过PCR反应来扩增目的基因。
四、问答题
1.生物大分子杂交的主要实验方法有哪些?主要用途是什么?
见上面题目的名词解释部分!