实验六、细胞电泳

一、 实验目的

1、了解细胞电泳的原理和意义，学习细胞（包括细胞器）电泳速度及ξ电位的测定方法；

2、通过动物红细胞电泳现象的观察和电泳速度的测定实验，掌握细胞电泳技术的实验操作；

3、通过实验了解细胞电泳技术在研究生命科学中的重要作用。

二、实验原理

在外界附加电场作用下产生多相系统相位移效应，称为电动现象，属于此种电动现象的包括电泳和电渗透。

在电场作用下，液体介质中的悬浮质点与介质间的相对运动，称为电泳。将细胞制成悬浮溶液，使其单个游离的细胞分散于等渗的介质中，在电场作用下，细胞在电泳室内发生运动。这种现象称为细胞电泳。

每种细胞在恒定的条件下（如温度、电压、电流、介质浓度、pH值等），其电泳速度和ξ电位十分稳定，但在各种有害因子、病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以细胞电泳速度和ξ电位值发生改变（降低）。因此，利用细胞电泳研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态具有重要的意义。

静止层：

早已发现，在外加电场的作用下，处在两端封闭的毛细管中不同深度的各层微粒的泳动速度是不同的。这是因为微粒受到电泳和电渗两种因素作用的结果。

单纯的电泳通常使各层微粒以同一速度移向正极，电渗的情况却比较复杂。在外加电场的作用下，沿管壁的一层，以较高的速度流向负极，越是远离管壁，液层的流速越低。管的两端是封闭的，管内的液体流动总量为零。因此，在同一时间内，有多少液体沿管壁附近流向负极，就必然有同量液体流向正极。流速是逐层变化的，在两种流向之间，存在流速为零的一层，即为静止层。

处在静止层上的微粒，其移动速率才等于电泳率。在静止层附近，深度—速度曲线的陡度很大，深度的微小偏离，将引起测定速度的较大误差。因此，准确地确定静止层，是显微电泳中一项最精细、最重要的工作。

断面长方形显微观察电泳槽的静止层在距显微观察电泳槽前壁的0.202D和0.798D处（可根据上面介绍的方法求得）。

玻璃小室内部容积为：40×18×0.8mm, 约0.58ml

玻璃小室由上下两块0.8mm的薄玻璃组合而成，上下两块玻璃内壁分别刻有不同方向的永久性条状标记线。玻璃小室外部有指示标签，按照标签即可在显微镜下寻找到内层上下的永久性标记。

玻璃小室的内层空间仅有0.8mm的高度，两端是开放的。在操作过程中应注意轻拿轻放，按压玻璃小室时应用手按压两边，而不要压在中间。两端留有一段可见的部分是为了观察液体及是否存留气泡。原则上加样时应加满，不能留有气泡。

玻璃小室的长度比固定架的电极块间距略长一些，为的是能紧密接触导电橡胶电极。

 

三、实验用材

SD-2型细胞电泳仪1台、光学显微镜1台、、细胞电泳架1个、5ml注射器1支。

氯化钠、蔗糖、肝素。

四、实验步骤

1、安放玻璃小室时应先将其一端对准一侧的胶块中间，用适当的力推压，将另一端的4/5留在胶块里，1/5露出在外，见图八、图九。然后用注射器针头插入玻璃小室的内部加样

2、加样时不应有液体渗漏，加样完毕不应有气泡存留

3、加样完毕将玻璃小室按平，插上电极，进行电泳。

4、按正确的方法取下玻璃小室，取下玻璃小室时不可直接向上用力，应该向外侧缓缓推出

 

五、作业

1、计算出红细胞电泳迁移的平均速率