实验二、DNA的细胞化学-孚尔根染色

一、 实验目的：

1、以Feulgen染色法为例学习细胞化学方法检测细胞核DNA的原理和方法；

2、观察DNA在细胞内的分布和相对含量

二、实验原理：

DNA经加热的弱酸水解后，分子中嘌呤和脱氧核糖间的糖苷键被切断，并且脱氧核糖与磷酸间的磷脂键断开，脱氧核糖的一端释放出游离得醛基。游离的醛基在原位与无色的Schiff试剂反应形成含有醌基的紫红色产物，因而使得细胞内含有DNA的部位呈现紫红色阳性反应。

三、 实验器材和材料：

水浴锅，载玻片、染色缸、显微镜等；1 M HCl；Schiff‘s试剂，亚硫酸水溶液, 5% 三氯乙酸，Carnoy试剂，95%酒精，苏木精等

鲫鱼（鲫鱼血细胞）

四、 实验步骤:

1, 取鲫鱼血制作血涂片，室温晾干；

2，Carnoy（3甲醇:1冰乙酸）固定（15分钟）；

3，95%乙醇处理（10分钟）；

4，75% 乙醇侵泡10分钟；

5,  蒸馏水侵泡2分钟；

6， 1 M HCl室温处理1-2分钟；

7,  置于1 M HCl在60℃温浴8-10 min(设置： 实验组，对照组)；

8，自来水洗涤一次（1-2分钟）；

9，Schiff试剂避光浸染30 min；

10，新鲜配制的亚硫酸水漂洗3次，每次2min；

11,  自来水轻缓漂洗2分钟；

12，加盖玻片，光学显微镜镜检观察。

五、 作业:

1、绘图表示孚尔根染色的结果，并写出实验原理，操作步骤， 提交实验报告。

2、思考细胞中其它组分如脂类，多糖，蛋白质，酸性磷酸酶的检测。