实验目的

学习生理学实验基本的组织分离技术。掌握蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

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实验原理

蛙的一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相近似，且其离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌控。坐骨神经-腓肠肌标本就是从蛙后肢取下的坐骨神经及其支配的腓肠肌组成，常用于观察神经冲动、兴奋性、兴奋过程、刺激的一些规律及肌肉的收缩特点等。因此，制备坐骨神经-腓肠肌标本是生理实验的一项基本操作技术。

实验对象  蛙类

实验步骤

1、破坏脑和脊髓  取蛙一只，用自来水冲洗。左手握蛙，并用食指压住其头部前端，拇指按压背部，使头前倾。其余手指握住躯干，蛙后腿伸直于手掌外，使其不容易挣脱。右手持刺蛙针由头前端沿中线向尾端划触，触及凹陷处即枕骨大孔。刺蛙针由此垂直刺入，再将刺蛙针尖端向前刺入颅腔，左右搅动，毁坏脑组织。然后将刺蛙针退出，再由枕骨大孔向后刺入椎管捣毁脊髓。在刺入捣毁过程中如蛙后肢挣扎并且绷直，则说明刺蛙针在椎管内。此后如蛙的四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则应按上述方法再进行捣毁。

2、去除躯干上部及内脏  将蛙仰卧于蛙板上，用镊子提起下腹部皮肤，然后用眼科剪分别向两前肢方向剪个倒三角。用同样的方法剪开肌肉，暴露内脏。接着用手捏住直肠，用力扯断直肠后把所有内脏向头端撕掉。此时可看到脊柱及下端的坐骨神经。找到坐骨神经的发出点，并从发出点往上2-3个椎间用粗剪刀把蛙剪断。仅保留一段脊柱、骶骨及两后肢。

3、剥除后肢皮肤  左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤，将标本放在盛有任氏液的培养皿中。

4、分离两腿  将标本提起，用粗剪刀从耻骨联合前面剪开两侧大腿,再沿正中线小心地由下而上剪开脊柱。

5、游离坐骨神经  取一腿放于蛙板上，用玻璃针沿脊柱向下游离坐骨神经，将标本背侧向上放置，在股二头肌与半膜肌之间找出坐骨神经的大腿部分，小心分离，使之完全暴露，并剪去神经干上的所有分支，游离坐骨神经至膝关节处。再将膝关节以上所有肌肉及股骨上端1/3剪去，即成坐骨神经小腿标本。

6、分离腓肠肌  用镊子将腓肠肌跟腱分离，并穿线结扎，在结扎处下端剪断跟腱。左手持线提起腓肠肌，用手术剪刀剪去与周围联系的组织，只保留腓肠肌起始端与骨的联系。

7、游离坐骨神经-腓肠肌标本  用粗剪刀将膝关节以下除腓肠肌外全部小腿剪去，留下的即是坐骨神经-腓肠肌标本。

实验观察

标本制成后，用经任氏液沾湿的锌铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌收缩，表示标本良好。如不能引起腓肠肌收缩，可能是制作过程中神经干受了牵拉、钳夹、污物侵蚀或干燥等因素的影响，致使标本失去了活性。

结论

刺激完整的支配肌肉的神经可以引起该肌肉收缩。