维生素

C及其制剂的分析

维生素C又称L-抗坏血酸，具有类似于糖的化学结构。它有四种光学异构体，其中以L-构型右旋体的生物活性最强，《中国药典》及美、英、日等国家的药典收载的均为L-型。

维生素C分子结构中有二烯醇羟基，因此具有酸性，其pK1=4.17，pK2=11.57；维生素C中的二烯醇羟基还具有较强的还原性，可以被多种氧化剂所氧化，《中国药典》利用此性质进行鉴别和测定含量。维生素C在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

一、维生素C的分析

(一)鉴别

1．与硝酸银试液的反应  鉴别方法为：取供试品0.2g，加水10ml溶解。取溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即生成银的黑色沉淀。

维生素C分子中的二烯醇基具有较强的还原性，可被Ag+氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色的单质银沉淀。

2．与二氯靛酚钠试液的反应  鉴别方法为：取供试品0.2g，加水10ml使溶解，取溶液5ml，加二氯靛酚钠试液1～2滴，试液的颜色即消失。

2，6-二氯靛酚为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，在碱性介质中为蓝色。与维生素C作用后生成还原型的无色酚亚胺，从而使颜色消失。

3．红外分光光度法  维生素C分子中含有羟基、酯基，它们在红外光谱中产生特征吸收峰，吸收峰的位置和归属如下：

 《中国药典》规定，本品的红外吸收光谱应与对照的图谱一致。

     (二)检查

1．溶液的澄清度与颜色  维生素C在放置过程中易被氧化呈色，《中国药典》规定检查溶液的澄清度与颜色，检查方法为：取本品3.0g，加水15ml，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。

2．铁盐和铜盐的检查  由于微量的铁盐和铜盐会加速维生素C的氧化、分解，《中国药典》在维生素C项下设立了铁和铜的检查项目，采用原子吸收分光光度法进行检查。

铁盐的检查方法：取样品5.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液(B)，另一份中加入标准铁溶液(0.01mg Fe/ml)1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为对照溶液(A)，用原子吸收分光光度法，在248.3nm的波长处分别测定供试品溶液的读数(b)和对照品溶液的读数(a)，b应小于(a－b)。248.3nm是铁的分析线波长。采用标准加入法检查，由于对照溶液中加入了等量的供试品，所以对照品的吸收为a－b，b<(a－b)即为合格，限量为百万分之二。

铜盐的检查方法与铁相似，称取供试品2.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加 0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液(B)，于另一份中加入标准铜溶液(0.01mgCu/ml)1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，作为对照溶液(A)，在324.8nm处分别测定供试品溶液和对照溶液的读数b和a，b<(a－b)即为合格，限量为百万分之五。

3．细菌内毒素  供注射用的维生素C需作此项检查。照“细菌内毒素检查法”检查，要求每1mg维生素C中含细菌内毒素的量应小于0.02EU。

除以上检查项目外，维生素C还需检查“草酸”、“炽灼残渣”和“重金属”。

(三)含量测定

维生素C的含量测定  维生素C具有还原性，《中国药典》采用碘量法测定维生素C的含量。

测定方法为：取供试品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪色。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的维生素C(C6H8O6)。

本法的滴定反应为：

由以上反应可知，1mol的I2相当于1mol的维生素C，维生素C的分子量为176.13，因此每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的维生素C(C6H8O6)。含量测定结果的计算公式如下。

式中，V为消耗碘滴定液的体积(ml)；T为滴定度，即每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当的维生素C的量；F为浓度换算因数，，其中C为碘滴定液的实际浓度(mol/L)；W为称样量(g)。

滴定前加入稀醋酸可使滴定时维生素C受空气中氧的氧化作用减慢，但供试品溶解于稀酸后，仍需立即滴定。使用新沸过的冷水作为溶剂，是为了减少水中溶解的氧对测定的影响。 

二、维生素C制剂的分析

《中国药典》收载的维生素C的制剂有片剂、泡腾片、泡腾颗粒、颗粒剂、注射剂等。维生素C制剂的分析方法基本相同，以下介绍片剂和注射剂的分析。

1. 维生素C片

维生素C片的鉴别方法（1）与维生素C原料药的第1、2项鉴别试验相同，即通过与硝酸银试液的反应和与二氯靛酚钠试液的反应来进行鉴别。

（2）取本品细粉适量（约相当于维生素C 10mg），加水10ml，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成l ml中约含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5:4:1）为展开剂，展开，晾干，立即（1小内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

维生素C片也需作“溶液的颜色”检查，取相当于1.0g维生素C的片粉，加水20ml使溶解后，滤过，取滤液，在440nm的波长处测定吸光度，不得过0.07。

维生素C片的含量也使用碘量法测定，测定的方法与原料药相同。《中国药典》规定本品含维生素C应为标示量的93.0%～107.0％。

2. 维生素C注射液

维生素C注射液的鉴别试验与维生素C原料药的第1、2项鉴别试验不相同。

2015版药典采用的鉴别方法为：

（1）取本品，用水稀释制成 l ml中含维生素 C 10 ml的溶液，取4ml,加 0. 1 mol/L的盐酸 溶 液 4ml，混匀，加0. 05%亚甲蓝乙醇溶液4滴，置 40°C水浴中加热，3 分钟内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。

（2）取本品，用水稀释制成1ml中约含维生素C 1mg的溶液，作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成1 ml中约含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl ，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5：4：1) 为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

其他检查的项目有pH值、颜色、草酸、细菌内毒素等。

维生素C注射液也采用碘量法测定含量，方法为：精密量取供试品适量(约相当于维生素C 0.2g)，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的维生素C(C6H8O6)。

测定时加入2ml丙酮是为了消除注射液内含有的抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响。亚硫酸氢钠可以和丙酮发生加成反应而被消耗除去。

《中国药典》要求维生素C注射液的含量应为标示量的90.0％～110.0％。