醋酸地塞米松及其制剂的分析

    甾体激素类药物，一些为天然药物，一些为人工合成品，它们均具有环戊烷并多氢菲母核，其基本骨架如下：

   甾体激素类药物根据其结构和药理作用的不同可分为四大类：肾上腺皮质激素类、雄性激素及蛋白同化激素类、孕激素类和雌性激素类。本章主要介绍醋酸地塞米松、丙酸睾酮、黄体酮及雌二醇等四种代表性的药物。本节以醋酸地塞米松及其制剂为例介绍该类药物分析的特点。

  醋酸地塞米松属肾上腺皮质激素类药物，其结构如下：

   醋酸地塞米松A环的C1、C2间，C4、C5间各有一个双键，并与C3上的酮基形成共轭体系，有紫外吸收；C17上为α-醇酮基的醋酸酯，α-醇酮基有还原性，醋酸酯有水解性；C11上有羟基，C10、C13有角甲基。

  (一)鉴别

    1．与斐林试剂的反应  醋酸地塞米松的C17-α-醇酮基具还原性，可与斐林试剂反应生成橙红色氧化亚铜沉淀，《中国药典》依此原理进行鉴别。

    取本品约10mg，加甲醇1ml，微温溶解后，加热的碱性酒石酸铜试液1ml，即生成红色沉淀。

    2．醋酸酯的反应  本品为醋酸酯类药物，在碱性条件下先水解成醋酸，然后在硫酸存在条件下与乙醇发生酯化反应，利用产生乙酸乙酯的香气进行鉴别。

   取本品50mg，加乙醇制氢氧化钾试液2ml，置水浴中加热5分钟，放冷，加硫酸溶液(1→2)2ml，缓缓煮沸1分钟，即产生乙酸乙酯的香气。

  3．红外光谱法  《中国药典》采用红外光谱法鉴别本品，用溴化钾压片测定，其主要特征峰如下：      

《中国药典》要求，本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。

   4．有机氟化物的反应   醋酸地塞米松分子结构中含有氟原子，可照《中国药典》附录“一般鉴别试验”中“有机氟化物”的鉴别方法进行鉴别。其原理是：有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，使有机结合的氟转变为无机的F－。该F－在pH4.3的醋酸-醋酸钠缓冲液中，可与茜素氟蓝试液和硝酸亚铈试液反应，形成蓝紫色的水溶性配合物，可供鉴别。

   方法：取供试品约7mg，用氧瓶燃烧法进行有机破坏，以水20ml和0.01mol／L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，俟燃烧完毕后，振摇使吸收。取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12％醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色；同时做空白对照试验。

5. 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

  (二)检查

   1．有关物质  取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每 lml中约含0. 5mg

 的溶液，作为供试品溶液（临用新制）；取地塞米松对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含0.5mg的溶液，精密量取lml与供试品溶液1ml,置同一100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有与对照溶液中地塞米松峰保留时间一致的杂质 峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.5%;其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中醋酸地塞米松峰面积的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积（与地塞米松峰保留时间一致的杂质峰面积乘以1.13）的和不得大于对照溶液中醋酸地塞米松峰面积（1.0%）。供试品溶液色谱图中小 于对照溶液中醋酸地塞米松峰面积0.01倍（0.01%）的峰忽略不计。
  2．硒  由于本品的合成路线中有一步反应要使用二氧化硒脱氢，成品中有可能引入微量硒。二氧化硒对人体有剧毒，必须对其进行控制。《中国药典》附录收载有“硒检查法”(二氨基萘比色法)。该法原理是：样品先经氧瓶燃烧法破坏，使硒游离并转变为Se6+，在吸收液中加盐酸羟胺，使Se6+还原为Se4+。然后在pH2.0的条件下，与2，3-二氨基萘反应，生成4，5-苯并苯硒二唑，用环己烷提取后，于378nm波长处测定吸光度，按对照品比较法测定硒含量。本品中硒的限度为0.005％。

   标准硒溶液的制备：取已知含量的亚硒酸钠适量，精密称定，加硝酸溶液(1→30)制成每1ml中含硒1.00mg的溶液；精密量取5ml置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后，再精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于1μg的Se)。  硒对照溶液的制备：精密量取标准硒溶液5ml，置100ml烧杯中，加硝酸溶液(1→30)25ml和水10ml，摇匀，即得。

   供试品溶液的制备：除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，照氧瓶燃烧法，用1000ml的燃烧瓶，以硝酸溶液(1→30)25ml为吸收液，进行有机破坏后，将吸收液移置100ml烧杯中，用水15m1分次冲洗燃烧瓶及铂丝，洗液并入吸收液中，即得。

   检查方法：将上述硒对照溶液与供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0±0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液(1→2)1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2分钟，静置分层，弃去水层，环己烷层用无水硫酸钠脱水后，照紫外-可见分光光度法，在378nm的波长处分别测定吸光度。供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度。

  除以上检查项目外，本品还需检查“干燥失重”和“炽灼残渣”。

  (三)含量测定

  《中国药典》测定醋酸地塞米松采用高效液相色谱法，以甲睾酮为内标，按峰面积计算含量。

   色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(40׃60)为流动相；检测波长为240nm。取有关物质项下的对照溶液20μl注入液相色谱仪，出峰顺序依次为地塞米松与醋酸地塞米松，地塞米松峰与醋酸地塞米松峰的分离度应大于20.0。

   测定方法：取本品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每lml中约含50μg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸地塞米松对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

  二、醋酸地塞米松制剂的分析

  (一)醋酸地塞米松片

   1．含量均匀度测定  醋酸地塞米松片为小剂量的片剂，需检查含量均匀度，《中国药典》采用紫外-可见分光光度法，按吸收系数法计算含量。其方法是：

  取本品1片，置乳钵中，研细，加甲醇适量，分次转移至25ml量瓶中，超声使醋酸地塞米松溶剂，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取醋酸地塞米松对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每lml中约含30μg的溶液，作为对照品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，应符合规定。

   2．含量测定  醋酸地塞米松片的含量测定也采用高效液相色谱法，色谱条件与原料药相同，但对柱效的要求更高。测定方法如下：

  色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(40׃60)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按醋酸地塞米松峰计算应不低于4000（2015药典未提及）。

   测定方法：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于醋酸地塞米松2.5mg)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声使醋酸地塞米松溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸地塞米松对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含50μg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。含量测定结果的计算公式为：

式中，AX、AR分别为供试品溶液和对照品溶液的峰面积，CR为对照品溶液的浓度(mg／ml)，W为称样量(g)，为平均片重(克／片)，标示量的单位为毫克／片。

  (二)醋酸地塞米松注射液

  醋酸地塞米松注射液采用四氮唑比色法测定含量。由于皮质激素类药物的C17-α-醇酮基有还原性，在强碱性条件下可将四氮唑盐，如氯化三苯四氮唑(TTC)还原成红色的三苯甲zaozi006，三苯甲zaozi006在485nm处有最大吸收，可用比色法测定含量。

 测定方法：取本品，摇匀，精密量取5ml(约相当于醋酸地塞米松25mg)，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量，振摇，使醋酸地塞米松溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取醋酸地塞米松对照品25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水  乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃的暗处放置40～50分钟，照紫外-可见分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得。

  含量测定使用对照品比较法，计算公式为：

式中，AX、AR分别为供试品溶液和对照品溶液的吸光度，CR为对照品溶液的浓度(mg／ml)，V为供试品的取样量(ml)，标示量的单位为mg／ml。