磺胺甲噁唑及其制剂的分析

磺胺类药物是一类用于治疗细菌感染性疾病的合成药物，本类药物均具有对氨基苯磺酰胺的基本结构：

不同的磺胺类药物系由于取代基R的不同，常用的磺胺类药物多为杂环取代(如磺胺甲噁唑、磺胺嘧啶等)或乙酰化(如磺胺醋酰钠)；磺酰胺上的氢可被重金属取代生成难溶性盐类药物(如磺胺嘧啶银)。《中国药典》收载的磺胺类药物有磺胺甲唑、磺胺嘧啶(包括钠、锌、银盐)、磺胺异唑、磺胺多辛、磺胺醋酰钠等及其制剂二十余个。除钠盐外，本类药物在水中几乎不溶，但可溶于稀盐酸、氢氧化钠试液或氨试液。本章介绍典型药物磺胺甲噁唑和磺胺嘧啶。其结构式如下：

磺胺甲噁唑在水中几乎不溶；在稀盐酸、氢氧化钠试液或氨试液中易溶。本品具有对氨基苯磺酰胺母核，其游离芳香伯氨基可以发生重氮化及重氮化-偶合反应；磺酰胺N上的氢具有弱酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。

一、磺胺甲噁唑的分析

(一)鉴别

1．与硫酸铜试液的反应  磺胺甲噁唑与硫酸铜反应生成难溶性沉淀。反应如下：

方法：取供试品约0.1g，加水与0.4%氢氧化钠溶液各3ml，振摇使溶解，滤过，取滤液，加硫酸铜试液1滴，即生成草绿色沉淀（与磺胺异噁唑的区别）。

  2．红外光谱法  磺胺甲噁唑分子结构中含有磺酰胺、芳胺、噁唑环及苯环，其红外光谱中的特征吸收峰归属如下：

 3．芳香第一胺的反应  磺胺甲噁唑具有芳香伯氨(芳香第一胺)基，可用重氮化-偶合反应鉴别。本反应收载于《中国药典》附录“一般鉴别试验”项下，称为“芳香第一胺类”鉴别反应。

  方法：取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，加0.1mol／L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，生成橙黄色至猩红色沉淀。反应式为：

(二)检查

1．酸度  取供试品1.0g，加水10ml，摇匀，依法测定，pH值应为4.0～6.0。

2．碱性溶液的澄清度与颜色  本品具有弱酸性，在氢氧化钠溶液中溶解。本项目检查不溶于碱性溶液的杂质和有色的杂质。检查方法为：取供试品1.0g，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液(取黄色3号标准比色液12.5ml，加水至25ml)比较，不得更深。

3．氯化物  取供试品2.0g，加水100ml，振摇，滤过；分取滤液25ml，依法检查，与标准氯化钠溶液5.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.01%)。

4．硫酸盐  取氯化物项下剩余的滤液25ml，依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.02%)。

5．有关物质  取供试品，加乙醇-浓氨溶液(9׃1)制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加乙醇-浓氨溶液(9׃1)稀释成每1ml中含50μg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以0.1%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-甲醇-二甲基甲酰胺(20׃2׃1)为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

6．炽灼残渣  按“炽灼残渣检查法”检查，遗留残渣不得过0.1%。

7．重金属  取碱性溶液的澄清度与颜色项下的溶液，照“重金属检查法”(第三法)检查，含重金属不得过百万分之十五。

8．干燥失重  取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5%。

 (三)含量测定

磺胺甲噁唑具有芳伯氨基，可用亚硝酸钠滴定法测定含量。《中国药典》采用永停滴定法指示终点。方法如下：

   取本品约0.5g，精密称定，加盐酸溶液(1→2)25ml溶解后，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol／L)滴定，每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol／L)相当于25.33mg的磺胺甲噁唑(C10H11N3O3S)。

  亚硝酸钠滴定法在盐酸酸性条件下进行，使用亚硝酸钠滴定液(0.1mol／L或0.05mol／L)滴定。为加快滴定反应的速度，滴定前要加入溴化钾2g作为催化剂。为避免亚硝酸钠在酸性条件下形成的亚硝酸挥发和分解，滴定时应将滴定管尖端插入液面下2／3处，用亚硝酸钠滴定液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为终点。

本法中，1mol的亚硝酸钠相当于1mol的磺胺甲噁唑，磺胺甲噁唑的分子量为253.28，所以滴定度(T)为：

式中，V为消耗滴定液的体积(ml)；T为滴定度；W为供试品的称样量(g)；F为滴定液的浓度校正因数，F=滴定液的实际浓度／滴定液的规定浓度。

二、磺胺甲噁唑片的分析

(一)检查

本品应符合《中国药典》附录片剂项下有关的各项规定。

(二)含量测定

磺胺甲噁唑片的含量测定方法与原料药相同，即采用亚硝酸钠滴定法测定，方法为：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺嘧啶0.5g)，照磺胺甲唑含量测定项下方法测定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol／L)相当于25.33mg的磺胺甲噁唑(C10H11N3O3S)。

式中，V为消耗亚硝酸钠滴定液的体积(ml)；25.33为滴定度；W为供试品的称样量(g)；为平均片重(克／片)；F为滴定液的浓度校正因数，F=滴定液的实际浓度／滴定液的规定浓度。

三、复方磺胺甲噁唑片的分析

复方磺胺甲噁唑片为《中国药典》收载的复方磺胺制剂，每片含磺胺甲噁唑400mg和磺胺增效剂甲氧苄啶80mg，甲氧苄啶的结构如下。

                           甲氧苄啶

本品含有两种成分，测定时可相互影响。因此在本品的鉴别和含量测定中均使用了专属性强的色谱方法。

  (一)鉴别 

1．沉淀反应  甲氧苄啶结构中的含氮杂环具有弱碱性，可与碘生成沉淀。《中国药典》采用此法鉴别本品中的甲氧苄啶，方法为：取本品的细粉适量(约相当于甲氧苄啶50mg)，加稀硫酸10ml，微热甲氧苄啶溶解后，放冷，滤过，滤液加碘试液0.5ml，即生成棕褐色沉淀。

2．薄层色谱法  薄层色谱法简便、分离效能高，可同时鉴别两种成分。鉴别的方法为：取本品的细粉适量(约相当于磺胺甲噁唑0.2g)，加甲醇10ml，振摇，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取磺胺甲噁唑0.2g与甲氧苄啶40mg，加甲醇10ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-N,N-二甲基甲酰胺(20׃2׃1)为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品溶液所显两种成分的主斑点的颜色与位置，应与对照品溶液的主斑点相同。

  磺胺甲噁唑与甲氧苄啶结构中均具有苯环，在254nm处有较强紫外吸收，因此在硅胶GF254薄层板上可形成荧光淬灭的暗斑，以供检测。

3．高效液相色谱法  本品采用高效液相色谱法测定含量，可同时进行鉴别。《中国药典》规定，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液两主峰的保留时间应与对照品溶液相应的两主峰的保留时间一致。

 4．芳香第一胺的反应  用于鉴别本品中的磺胺甲噁唑。鉴别的原理和方法与磺胺甲噁唑原料药一致。

  (二)检查

除片剂的常规检查项目外，《中国药典》要求检查本品的溶出度。照“溶出度测定法”(第二法)测定，以0.1mol／L盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，精密量取续滤液10μl取溶液适量，照含量测定项下的方法测定，计算每片中两种药物的溶出量，限度为标示量的70%。

 (三)含量测定

制剂中的磺胺甲噁唑含量可不经分离用亚硝酸钠滴定法直接测定，但甲氧苄啶含量的测定受磺胺甲噁唑的干扰，若采用非水溶液滴定法测定，由于磺胺甲噁唑也具有弱碱性，可干扰测定。由于两个药物的紫外光吸收图谱彼此重叠，采用紫外-可见分光光度法测定时，制剂中两个组分亦彼此有干扰，需采用计算分光光度法(双波长法)，但双波长法的重现性较差。因此，《中国药典》采用高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量，方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈-三乙胺(799׃200׃1)(用氢氧化钠试液或冰醋酸调节pH值至5.9)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按甲氧苄啶峰计算应不低于4000，磺胺甲噁唑峰与甲氧苄啶峰的分离度应符合要求。

测定方法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑44mg)，置100ml量瓶中，加0.1mol／L盐酸溶液适量，超声处理使主成分溶解，用0.1mol／L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磺胺甲噁唑对照品与甲氧苄啶对照品各适量，精密称定，加0.1mol／L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含磺胺甲噁唑0.44mg与甲氧苄啶89μg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积分别计算，即得二组分的含量。各组分含量测定结果的计算公式为：

 式中，AS为供试品溶液中各组分相应的峰面积，AR为对照品溶液中各组分相应的峰面积；CR为对照品溶液中各组分相应的浓度(mg／ml)，W为称样量(g)，为平均片重(克／片)，分子上的100为供试品溶液的稀释体积(ml)，标示量为复方制剂中各组分的标示量(毫克／片)。