苯巴比妥及其制剂的分析

 巴比妥类药物是巴比妥酸的衍生物，具有丙二酰脲的基本结构：

常用巴比妥类药物多为巴比妥酸的5，5-二取代物，亦有少数为1，5，5-三取代物或C2位为硫取代的硫代巴比妥酸的5，5-二取代物。本类的代表性药物有苯巴比妥、司可巴比妥钠及硫喷妥钠。其结构式为：

一、苯巴比妥的分析

苯巴比妥在乙醇或乙醚中溶解，在水中极微溶解，在氢氧化钠或碳酸钠溶液中易溶。本品具有丙二酰脲母核和苯环结构，可发生丙二酰脲的一般反应和苯环的特征反应。

(一)鉴别

1．与亚硝酸钠-硫酸的反应：苯巴比妥在硫酸存在下与亚硝酸钠作用生成橙黄色产物，随即转为橙红色。可用于区别苯巴比妥与其他不含苯环的巴比妥类药物。

方法：取供试品约10mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5mg，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。

2．与甲醛-硫酸的反应：苯巴比妥在硫酸存在下与甲醛反应生成玫瑰红色产物，可用于区别苯巴比妥与其他巴比妥类药物。

方法：取供试品约50mg，置试管中，加甲醛试液1ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。

3．红外光谱法：苯巴比妥具有羰基、酰胺和苯环结构，有特征红外光谱，可用于鉴别。《中国药典》规定，本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。

4．丙二酰脲类的鉴别反应：巴比妥类药物含有丙二酰脲结构，在碱性条件下，可与某些重金属离子反应，生成沉淀或有色物质。这一特性可用于本类药物的鉴别。

(1)银盐反应  取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。

反应式如下：

巴比妥类药物的一银盐可溶于水，而二银盐不溶。反应中第一次出现的白色沉淀是由于硝酸银局部过浓，产生少量巴比妥二银盐，振摇后，转换为可溶性的一银盐，继续滴加硝酸银至过量，则完全生成白色二银盐沉淀。

(2)铜盐反应  取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。

(二)检查

苯巴比妥的合成工艺如下：

《中国药典》规定，除检查“干燥失重”和“炽灼残渣”外，还需检查“酸度”、“乙醇溶液的澄清度”和“中性或碱性物质”等项目，以限制相关杂质的含量。

 1．酸度  当乙基化反应进行不完全时，会与尿素缩合生成苯丙二酰脲。该分子酸性较苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂显红色。《中国药典》采用指示剂法控制酸性物质的量。

方法：取供试品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1分钟，放冷，滤过，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色。

2．乙醇溶液的澄清度  苯巴比妥酸杂质在乙醇溶液中溶解度小，而主成分苯巴比妥溶解度大，据此可通过检查乙醇溶液的澄清度来检查苯巴比妥酸杂质。

方法：取供试品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3分钟，溶液应澄清。

3．中性或碱性物质  这类杂质主要是中间体I的副产物2-苯基丁二酰胺、2-苯基丁二酰脲或分解产物。这些物质为中性或碱性物质，不溶于氢氧化钠试液而溶于醚，利用这一特性，将它们与主成分分离，再以重量分析法确定是否超过规定的限量。

  方法：取供试品1.0g，置分液漏斗中，加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水5ml与乙醚25ml，振摇1分钟，分取醚层，用水振摇洗涤3次，每次5ml，取醚液经干燥滤纸滤过，滤液置105℃恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥1小时，遗留的残渣不得过3mg。

4．有关物质取本品，加流动相溶解并稀释制成每lml中含lmg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75)为流动相，检测波长为220nm；理论板数按苯巴比妥峰计算不低于2500，苯巴比妥峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。精密量取对照溶液与供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0. 5% ) ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0% ) 。

(三)含量测定

《中国药典》采用银量法测定苯巴比妥的含量，以电位法指示终点。

方法：取供试品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新制的3％无水碳酸钠溶液15ml，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液相当于23.22mg的苯巴比妥(C12H12N2O3)。

  滴定反应的原理与丙二酰脲类鉴别反应中的银盐反应相同。即利用滴定过程中先生成可溶性的一银盐，化学计量点稍过，过量的银离子与药物形成难溶的二银盐。曾利用二银盐浑浊指示终点，但实际操作时，终点不易准确判断，故采用电位法指示。以上滴定中，1mol的硝酸银相当于1mol的苯巴比妥，苯巴比妥的分子量为232.24，所以滴定度T=0.1×232.24=23.22(mg)。

式中，V为消耗滴定液的体积(ml)；T为滴定度；W为供试品的称样量(g)；F为滴定液的浓度校正因数，F=滴定液的实际浓度／滴定液的规定浓度。

二、苯巴比妥片的分析

(一)含量均匀度的测定

苯巴比妥片剂有15mg、30mg和100mg等不同规格。对于小剂量规格(15mg与30mg)，《中国药典》规定检查含量均匀度。《中国药典》采用高效液相色谱法检查含量均匀度。

方法：取本品1片，置50ml (30mg规格）或25ml(15mg规格）量瓶中，加流动相适量，照含量测定项下的方法，自“超声20分钟”起，依法测定，应符合规定。

(二)溶出度的测定

苯巴比妥为难溶性药物，《中国药典》规定检查溶出度。取本品，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取溶液滤过，精密量取续滤液适量，加硼酸氯化钾缓冲液(pH 9. 6)定量稀释制成每lm l中约含5μg的溶液，摇匀；另取苯巴比妥对照品，精密称定，加上述缓冲液溶解并定量稀释制成每lm l中含5μg 的溶液。取上述两种溶液，照紫外-可见分光光度法，在240nm的波长处分别测定吸光度，计算每片的溶出量。限度为标示量的75% ，应符合规定。

(三)含量测定

《中国药典》采用高效液相色谱法测定苯巴比妥片的含量。

色谱条件与系统适用性试验：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30 : 70 )为流动相；检测波长为220nm。

理论板数按苯巴比妥峰计算不低于2000，苯巴比妥峰与相邻色谱峰间的分离度应符合要求。

测定方法：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于苯巴比妥30mg)，置50m l量瓶中，加流动相适量，超声20分钟使苯巴比妥溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取苯巴比妥对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含苯巴比妥60µg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。