两栖动物观测方法

1.       观测准备

1.1        明确观测目的

开展两栖动物观测的目的是了解两栖动物多样性的现状和变化趋势，掌握人类活动等干扰因素对两栖动物的影响，为两栖动物多样性保护和管理工作提供技术支撑。

1.2        选择观测对象

观测对象应是观测区域内所有的两栖动物，也可针对某一类群或特定物种（濒危物种或保护物种）开展观测。

1.3        确定观测区域

在开展观测之前，要了解和熟悉观测对象的生物学和分布特征，确定观测区域。可以根据不同物种生活史特点以及活动节律（如繁殖、迁移、越冬等），选择两栖动物分布的重要地区、典型地区、过渡地区等开展观测。

1.4        制定观测方案

观测方案应包括观测范围、观测方法、观测内容和指标、观测时间、数据处理、观测者等。

1.5        培训观测者

为观测者提供分类鉴定、观测方法和野外安全培训，使其能在野外准确地识别两栖动物成体、亚成体、幼体、蝌蚪和卵，掌握野外操作规程和安全防范措施。

1.6        准备观测仪器和工具

包括塑料桶、塑料布、铁锹、瓦片、竹筒（或PVC桶）、广口瓶、卷尺、游标卡尺、手术剪、镊子、脱脂棉、组织管、组织盒、注射器、照相机、全球定位系统（GPS）定位仪、pH计、指南针、电子秤、电子标签、福尔马林、乙醇、蛇药、外伤药等。

2.       观测样地设置

观测样地应具有代表性，能代表观测区域的不同生境类型。所选择的观测样地应操作方便、可行，便于观测工作的开展。所选择的观测样地一旦确定应保持固定，以利于观测工作的长期开展。采用GPS定位仪和其他方法对观测样地定位，并在电子地图上标明观测样地的位置。

3.       样线法

根据两栖动物分布与生境因素的关系如海拔梯度、植被类型、水域状态等设置样线。样线尽可能涵盖不同生态系统类型。

在湿地或草地生态系统，可采用长样线，长度500～1000m之间；在生境较为复杂的山地生态系统，可设置多条短样线，长度20～100m之间。每个观测样地的样线应在7条以上，短样线可适当增加数量。样线的宽度根据视野情况而定，一般为2～6m。

在水边观测两栖动物可以在水陆交汇处行走。观测时行进速度应保持在2km/h左右，行进期间记录物种和个体数量，不宜拍照和采集。通常2人合作，1人观测、报告种类和数量，另1人填表记录（记录表参见附录A）。

利用GPS定位仪对样线的起点和终点进行定位，可以开启手持GPS定位仪的线路功能，将样线线路附加到电子地图上。

根据两栖动物的活动节律，一般在晚上开展观测。每条样线在不同天开展3次重复观测，应保持观测时气候条件相似。

样线法能估算种群相对密度，计算方法如下：

            

4.       样方法

在观测样地内随机或均匀设置一定数量的样方，样方应尽可能涵盖不同的生境类型和环境梯度。样方一般设置为方形，大小可设置成5m×5m或10m×10m。样方之间应间隔100m以上。每个观测样地的样方数应在7个以上。

记录样方内见到的所有两栖动物种类和个体数量。依次翻开样方内的石块，检视石块下的个体（包括卵）。

样方法能估算种群相对密度，计算方法同样线法。

除了常用的样线法和样方法之外，两栖类调查方法还有：栅栏陷阱法、人工覆盖物法、人工庇护所法、标记重捕法。具体技术规范可登录中华人民共和国生态环境部数据中心（http://datacenter.mee.gov.cn/websjzx/report!list.action?xmlname=1520238134405）查阅《中华人民共和国国家环境保护标准-生物多样性观测技术导则两栖动物（HJ 710.6-2014）》。

5.       捕捉与样本处理方法

在观测两栖动物时，尽量不捕捉个体，但若为开展物种鉴定、遗传多样性分析、疾病分析等研究需采集个体或组织样本时，应按照《HJ 628-2011生物遗传资源采集技术规范（试行）》的规定执行，避免对动物种群大小和个体生存及生理功能造成大的影响。

在夜间可用强光灯照射使两栖动物暂时失去视觉后用手捕捉。对于水中的两栖动物可以用抄网捕捉。

将采集到的动物组织样本放入2.0ml灭菌组织管中，加入90～100%乙醇浸泡。样本应贴上标签，标明采集日期、地点和采集人，避光保存。回到实验室后立即置于-20℃冰箱保存。