胰蛋白酶比活力的测定

实验原理

胰蛋白酶是一种水解酶，该酶对于由碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其它氨基酸所形成的肽键具有高度专一性。

 

BAEE在253nm的紫外吸收远低于BA，在胰蛋白酶催化BAEE水解生成BA的过程中，反应体系在253nm的紫外吸收值会随之增加，因此可以用ΔA253nm来计算胰蛋白酶的酶活力。

胰蛋白酶酶活力单位：在本实验条件下，以

BAEE为底物，每分钟使ΔA253nm增加0.001所

需的酶量定义为1个酶活力单位。

胰蛋白酶比活力：每毫克胰蛋白酶所具有的酶

活力单位数。

主要试剂和实验仪器 

底物：2mmol/L BAEE

胰蛋白酶（1mg/ml）

0.05mol/L pH7.8 Tris-HCl 缓冲液

紫外分光光度计 

实验操作

1. 取2支试管，分别标号为1（空白组）、2（实验组），按照下表顺序加入各相关试剂。

2. 实验组中加入胰蛋白酶后立即混匀，在30s内向比色皿中准确加入3ml待测样品，用分光光度计将空白组A253nm校正至0，而后开始记录时间，测定实验组A253nm。

3. 每隔1min读取A253nm值一次，至6min终止读数。

4. 计算每分钟平均A253nm增加值，即ΔA253nm/min，进而计算得出胰蛋白酶活力单位数（U）及胰蛋白酶比活力（U/mg）。