蛋白质的鉴定与分析
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一. 纯度鉴定
(1)电泳法
(2)化学法
(3)仪器法
二. 分子量测定
(1) (2)利用凝胶过滤法测定分子量
公式:Ve-Vo = a-b logM
logM = K1-K2Ve
(3)利用SDS—PAGE法测定分子量
公式: logM = K1-K2μR
(4)质谱法
(5)通过渗透压测定蛋白质分子量
三.蛋白质含量测定
(1)凯氏定氮法
(2)紫外吸收法
(3)双缩脲法
(4)福林试剂反应
(5)考马斯亮蓝G-250法
1.紫外吸收法
由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系,因此可作蛋白质定量测定
2.双缩脲法:两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用,生成粉红色复合物。肽键越多颜色越深;受蛋白质特异性影响小。
蛋白质定量测定;测定蛋白质水解程度

3.福林试剂反应
(1)酪氨酸、色氨酸的反应(还原反应)
(2)福林试剂:磷钼酸-磷钨酸
(3)福林试剂是多种化合物配制成的混合物。蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸,在碱性条件下,可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色(生成钼蓝和钨蓝化合物)。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比, 可用比色法测定。
(4)与双缩脲法结合---Lowry法
(5)在碱性条件下,蛋白质与硫酸铜发生反应
(6)蛋白质-铜络合物,将福林试剂还原,产生磷钼蓝和磷钨蓝混合物
灵敏度提高100倍
4.考马斯亮蓝G-250
(1)本身为红色,与蛋白质反应呈蓝色
(2)与蛋白的亲和力强,灵敏度高
(3)1---1000微克/毫升

