实验六  白细胞计数

学习目标

学习、掌握应用稀释法计数白细胞的方法

学习要求

教学重点 采用稀释法计数单位容积血液内的白细胞数。

教学难点 白细胞数计算方法

注意事项

(I）静脉血稀释前应充分棍匀， 不能有凝集。 末梢血在穿刺后应避免挤压，使之自由流出， 且立即稀释， 以免产生凝集。

(2）小试管、 计数板均应清洁、干燥， 以免杂质、微粒等被误认为细胞。

3）应准确量取血液样本 、恰当稀释。 计数池只能加入一定量的稀释样本， 过量 则使盖玻片抬高，从而改变计数池的充液高度。

(4）白细胞数量过高时，可加大稀释倍数， 如超过3 0x 109 /L， 可用I: 100稀释；白细胞数量过低时，可计数 8个大方格的白细胞数或减少稀释倍数，如I: 10稀释。

(5）白细胞计数的稀释液破坏或榕解所有的无核红细胞。 

(6）白细胞总数在正常范围内时， 大方格间的细胞数不得相差 8个以上， 两次重复计数误差不得超过10% 。

实验操作

1.采血及稀释

用1 mL移液管吸取0.38 mL 白细胞稀释液放于1号小试管中备用。

消毒兔耳耳尖部的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，擦去第一滴血液，用一次性毛细管准确采取血液20 µL擦净管外血，将滴管插入盛有上述稀释液的试管底部，轻轻吹出血液，并用上清液清洗毛细管2～3次，轻轻摇动试管1～2 min，使血液与稀释液充分混匀。

2.认识血细胞计数板

计数板通常有前后两个计数室，每室划分9个大格， 格与盖玻片的距离为0.1 mm，每大格边长为l mm，面积为1 mm² ，体积为0.1 mm³ 四角的4个大方格被划分为16个中方格，一般此4个大方格用于白细胞的计数；中央大方格中的每一个中方格被3条等分的线划分，故中央大方格共得 25个中方块，每个中方块边长为0.2 mm，面积为0.04 m时，体积为0.004 mm3，每个中方格又得16个小方格。 一般情况下，中央大方格四角和正中的中方格及其内部的小方格用于红细胞的计数。

3．将盖玻片放入计数板中央， 用洁净玻璃棒蘸取少量已稀释混匀的血细胞悬浮液，从盖玻片边缘一次性滴入计数室内，使之灌满，静置2～3 min，待细胞下沉后计数。

4.计数方法  用高倍镜，计数中央大方格四角和正中的5个中方格内的红细胞总数。计数时由左向右，由上向下，将上侧和左侧线上的红细胞数入。

5.计算 白细胞数/mm³ ＝5个中方格数得的白细胞总数×10⁴

白细胞数/L＝红细胞数／mm³ ×10⁶