点此进入直播

点此进入慕课

一、核酸的紫外吸收性

核酸在波长260nm处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键决定的。OD₂₆₀的应用：

1. DNA或RNA的定量

     OD₂₆₀=1.0相当于：50μg/ml 双链DNA

40μg/ml 单链DNA（或RNA）

                       20μg/ml 寡核苷酸

2. 判断核酸样品的纯度

     DNA纯品：OD₂₆₀/OD₂₈₀ = 1.8

RNA纯品：OD₂₆₀/OD₂₈₀ = 2.0

二、DNA的变性和复性           

1. DNA的变性

1.1 定义

    在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。

1.2 方法

    过量酸、碱，加热，变性试剂如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。

1.3 理化性质变化

    紫外吸收值增大，粘度下降，比旋光度下降，生物活性降低或丧失。

增色效应——DNA变性时其溶液OD₂₆₀增高的现象。

1.4 本质

双链间氢键的断裂

1.5 解链温度（Tm）

    解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。G+C 含量越高，解链温度就越高。

2. DNA的复性

2.1定义

在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。

2.2 退火

热变性的DNA经缓慢冷却后的复性过程称为退火。

三、分子杂交与探针技术

1. 定义

是指不同来源的单链核酸之间，只要存在一定程度的碱基配对关系，就可能形成双螺旋结构杂化双链。如DNA-DNA，RNA-RNA，DNA-RNA。

2. 应用

    研究DNA分子中某一基因的位置；

确定核酸分子间的序列相似性等；

测定基因突变和用以遗传病的诊断。

四. 核酸酶—可水解核酸的酶

   ① 依据底物不同可分为：DNA酶、RNA酶

   ② 依据切割位点不同可分为：核酸外切酶、核酸内切酶

五. 核酸酶的功能

① 参与DNA的合成、修复以及RNA的剪接；

② 清除多余的、结构和功能异常的核酸，以及侵入细胞的外源性核酸；

③ 降解食物中的核酸；

④ 体外重组DNA技术中的重要工具酶；

＊核酸内切酶是体内重组DNA技术中重要的工具酶。