胚胎移植到假孕小鼠

1 实验材料：动物及胚胎

2 实验器械

1）干净鼠笼  2）镊子  3）注射器  4）剪刀  5）缝合针线   6）创口夹  7)移植管

3 试剂

1）麻醉剂  2）70%乙醇

 

 

1）将受体小鼠称重并腹腔内注射麻醉剂使其麻醉。

2）然后将小鼠置于9mm塑料培养皿的盖子，纸巾或其他垫子上，以便在显微镜下操作。

3）将胚胎吸入移植管。

a. 吸入胚胎前先在移植管中吸入少量M培养液，再吸入一个小的气泡，然后再吸入M2培养液，之后再吸入第二个小泡，如此重复直到降低虹吸作用能够很好地控制液体的进出为止。

b. 再将胚胎及尽可能少的M2培养液吸入移植管（高度大约5—7mm），在移植管的末端再吸入一个小气泡。

c. 将连着嘴控管的移植管用橡皮泥固定于立体显微镜台面上，直到进行子宫内胚胎移植。

4）暴露受体鼠子宫。

a. 用棉球蘸70%乙醇消毒小鼠的背部，如果必要的话也可以去毛。沿着背中线从最后肋骨开始用剪刀在皮肤上剪一个小口，用蘸70%乙醇的棉纸擦洗创口，以去除散落的毛发。

b. 向四周滑动皮肤以便能够透过体壁看到脂肪垫（白色），然后用镊子夹起体壁，在卵巢所在处避开大血管剪一小口。

5）胚胎移植

a. 用钝头镊子夹住脂肪垫拉出附带的右侧卵巢、输卵管和子宫，用镊子夹住脂肪垫、使其沿背中下垂，将卵巢、输卵管暴露于体腔外。

b. 小心地将小鼠连同塑料培养皿盖一起放到立体显微镜下。

c. 用钝镊子小心地夹住子宫角的尖端，在宫管结合部下几毫米处避开血管用针在子宫壁上刺一个斜角向上的小洞。要确保针刺进子宫腔而又没有穿透另一次子宫壁。

d. 注意用针刺成的小洞，将针拔出，插入盛有囊胚的移植管，深度大约５ｍｍ，然后将囊胚吹入子宫。要保证最靠近囊胚的气泡以到达移植管的尖部和所以得胚胎被吹入。一边吹一边观察，当第一个气泡到达子宫开口时拔出移植管。不要吹入太多的气泡，因为气泡会影响着床。

e. 松开夹子，将小鼠从显微镜台上取下，用钝头镊子夹住脂肪垫，将子宫＼输卵管＼卵巢等放回体腔，缝合体壁，缝合或夹住皮肤创口。

6）需要的话，重复步骤３）、４）、５），可将胚胎移植到左侧子宫角。

7）术后将小鼠放置于干净的鼠笼里，用一个50W的灯泡保温（注意盖住眼睛），直到苏醒。