核酸分子杂交检测法

    利用碱基配对原理进行的分子杂交是鉴定基因重组体的常用方法。杂交的双方是待测的受体细胞基因片段与由插入片段基因制备的DNA或RNA探针。

常用的筛选重组体的杂交方法有

    1、菌落和噬菌斑原位杂交

    2、斑点印迹杂交

3、R环检测

4、Southern印迹杂交

    5、Northern印迹杂交

1、原位杂交筛选

特点：对应的菌斑或噬菌斑位置不变，可以直接由转化后的平板上找出阳性菌落。

    2、斑点印迹杂交：直接将噬菌体上清液或提取的转化子的质粒点在NC膜上，用探针杂交，自显影后出现黑点即为阳性。

3、R-环检测法

（1）原理：利用DNA-RNA杂交形成的R环进行检测。

（2）选择过程：用外源基因的mRNA与重组载体杂交。

在70%甲酰胺（变性剂）中，把DNA双链变性，复性的时候，DNA-RNA杂交分子比DNA-DNA双链更稳定。电镜下可见一种R-环形结构。缺点在于需要电镜，因此用得少。

4、Southern印迹杂交：见第二章（核酸基本操作技术）：

5、Northern blotting：用DNA（或RNA）探针检测RNA样品。主要检测插入片段是否被转录。从宿主细胞中提取RNA，再用探针杂交。