核酸酶

一、核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始降解核苷酸的酶。包括单链DNA外切酶和双链DNA外切酶。

（一）、单链DNA外切酶

1、大肠杆菌核酸外切酶I（Exo I）：5’®3’外切

2、大肠杆菌核酸外切酶Ⅶ（Exo Ⅶ）：5’®3’、3’®5’外切。它是唯一不需要Mg²⁺离子的活性酶。

（二）、双链DNA外切酶

1、核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）

对双链DNA具有高度特异性，可降解平头末端、3‘凹陷末端及有切口的DNA，但不降解单链DNA和带3’突出末端的双链DNA.此外，还可降解DNA：RNA杂交分子中的RNA

主要用于在DNA双链的末端产生出单链区域，与klenow配合进行3’端标记。

2、l核酸外切酶：5’®3’外切，从5’-P切割双链DNA，使DNA双链变成短的单链，成为测序模板。

二、核酸内切酶

1、核糖核酸酶H（RNaseH）

来自小牛胸腺，现在已可以用大肠杆菌进行生产。

特性：能特异性降解DNA:RNA杂交双链中的RNA链

用途：与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ和DNA连接酶一起参与cDNA克隆中第二条DNA互补链的合成（首先以mRNA为模板在反转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后在RNaseH的作用下切割RNA，造成缺口，再利用大肠杆菌DNA聚合酶I以每一段RNA为引物合成DNA，最后通过DNA连接酶连接起来。）

2、脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNaseⅠ）

来自牛胰脏，是一种糖蛋白。

特性：随机内切双链或单链DNA分子

用途：

a.与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ一起参与切口平移 

b.在Mn²⁺存在下，通过鸟枪法制作DNA文库，便于大片段的测序

c.使用DNaseⅠ足迹法测定DNA结合蛋白在DNA上的精确结合位点

d.使用无RNase的DNaseⅠ去除转录产物中的模板DNA

3、单链内切和外切的核酸酶- S1核酸酶

来自米曲霉，是一种含锌的蛋白质。

特性：（1）高度单链特异性：不切割双链。

（2）反应条件：① 低水平Zn²⁺，② pH4.0~4.3，③ NaCl  10 - 300 mM。

S1核酸内切酶的功能：

（1）催化单链RNA或DNA降解。

（2）切掉双链核酸中的单链区。

（3）降解限制酶切形成的单链突出端。

（4）不能降解双链DNA或RNA-DNA杂交链

三、单链内切双链外切的核酸酶：Bal31核酸酶

1. 来源：埃氏交替单胞菌。

2. 功能：

既有单链特异的DNA（RNA）内切酶活性；又有双链特异的DNA外切酶活性。因此可降解双链DNA或其上的单链缺口、未配对的单链区域。

3. 反应条件：Mg²⁺、Ca²⁺。EGTA（乙二醇双四乙酸）专一性螯合Ca²⁺，可终止反应。

4. Bal31的用途：

（1）定位测定DNA片断中的限制酶位点分布。

该方法称为Bal31控制消化法：

用Bal31消化线性DNA，并在不同的时间加入EGTA终止反应，再用限制性内切酶酶切电泳。与对照组（不用Bal31消化，只用相同的限制性内切酶酶切）的电泳比较。根据酶切片断消失的先后顺序，判断这些片断在原DNA中的位置。

（2）诱发DNA突变。