核酸的凝胶电泳

一、电泳的基本原理

（一）、带电荷的分子在电场中会以一定的速率向与其电荷性质相反的电极移动，速度称为电泳迁移率。

（二）、电泳迁移率同电场的强度和分子本身所带的净电荷数目成正相关。

（三）、电泳迁移率同分子与介质的摩擦系数成反比。

（四）、摩擦系数主要与分子的大小、形状以及介质的粘度有关。

（五）、如果电场强度一定（电压和电极距离）、电泳介质相同（电泳液和凝胶）时：分子在电场中迁移的速度主要取决于分子本身的大小和形状。形状相似的分子的迁移速度主要与分子量相关，分子量越大，移动越慢。

二、琼脂糖凝胶电泳

（一）、琼脂糖是一种线性多糖聚合物，从红色海藻产物琼脂中提取而来。

（二）、琼脂糖凝胶：琼脂糖在水里（或电泳液）中加热到沸点后溶解，冷却后又凝固成均匀的的胶体“胨”。琼脂糖的浓度决定凝胶的空隙（密度）。浓度越高，空隙越小。

（三）、琼脂糖凝胶的分辨力

空隙大小决定其分辨分子大小的能力，即浓度决定了其分辨率。空隙小（高浓度），分辨率高：小分子较易通过，而大分子难通过（可用于分离大小差别较小的不同的DNA片段）；空隙大（低浓度），分辨率低：大小分子几乎以同等速率通过（因分子量不同，因此也有区别，但区别不大，因此难以区分大小不同的DNA片段）。

三、聚丙烯酰胺凝胶电泳

凝胶由丙稀酰胺(Acr)和甲叉双丙稀酰胺(Bis)在TEMED(N,N,N,N,’-四甲基乙二胺）和过硫酸铵（AP)催化聚合而成，具有分子筛效应。

分辨力高于琼脂糖凝胶电泳，适合于低分子DNA（1～1000bp）、蛋白质、寡聚核苷酸的分离和DNA的序列分析。

无色透明，比琼脂糖凝胶紫外吸收低，抗腐蚀性强，机械强度高，韧性好

四、凝胶染色

EB是扁平分子，能插入DNA碱基平面之间，但不与琼脂糖结合。EB在300nm紫外光照射下能发红色荧光，即可显示DNA泳带在凝胶中所处的位置。

荧光强度与DNA含量及大小成正比。

注意：EB是DNA诱变剂。配制时和使用时要戴橡皮手套。勿将其洒在地面或桌子面上，用后各种器具要用水彻底冲洗。