分光光度法简介

分光光度法（spectrophotometry）是基于物质的分子对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，是应用分光光度计测量溶液在某一波长下的吸光度以确定溶液中被测物质含量的分析方法。

分光光度法可分为：紫外分光光度法（200nm-380nm）、可见光光度法（380nm-760nm）和红外分光光度法（780nm-300mm）。

朗伯比尔定律（lambert-beer law）是分光光度法的基本定律，是描述物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物质的浓度及其液层厚度间的关系。其基本原理如下

使用前提条件

比尔- 朗伯定律的成立是有前提的，即：

1. 入射光为平行单色光且垂直照射；

2. 吸光物质为均匀非散射体系；

3. 吸光质点之间无相互作用；入射光波长不同时，吸光系数也不同。吸光系数越大，溶液对入射光的吸收就越强，测定的灵敏度就越高。

4. 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收过程，无荧光和光化学现象发生。根据比尔- 朗伯定律，当吸收介质厚度不变时， A 与c 之间应该成正比关系，但实际测定时，标准曲线常会出现偏离比尔- 朗伯定律的现象，有时向浓度轴弯曲（负偏离），有时向吸光度轴弯曲（正偏离）。造成偏离的原因是多方面的，其主要原因是测定时的实际情况不完全符合使比尔- 朗伯定律成立的前提条件。