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2 课件
实验六 血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法)
Determination of Total Cholesterol in Serum (Cholesterol Oxidase Method)
实验目的
• 掌握血清总胆固醇测定的原理和方法(酶法)
• 了解血清总胆固醇的正常范围及临床意义
• 血脂测定方法很多,目前临床实验室基本检验项目有:血清外观分析,TC,TG,HDL-C,LDL-C测定。
• 进一步可做HDL亚组分,IDL,Apo(如ApoAⅠ、ApoB100),Lp(a)及脂蛋白电泳,LPL,LCAT测定。
• 为保证分析结果的可靠性,标本的采集应在餐后12h以上。
血清总胆固醇测定
• 胆固醇是人体重要的脂类成分,具有重要的生理功能,如合成类固醇激素,维生素D3,胆汁酸,并构成细胞膜成分
• 血液中的胆固醇仅有10-20%是直接从食物中摄取,其余是由肝和肾上腺等组织合成。
• 胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系,故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。
• TC (total cholesterol)包括FC(free cholesterol, 1/3)和CE( cholesterol ester 2/3)。• 血清中胆固醇在LDL中最多,其次是HDL和VLDL,CM最少。
血清总胆固醇测定
• TC测定方法很多,分为化学测定法、酶气相色谱法、高效液相色谱法等。
• 化学法一般包括:抽提、皂化、毛地黄苷沉淀纯化、显色与比色五个阶段。
• 目前临床上常用的是胆固醇氧化酶法。
化学测定法
• 在胆固醇的比色分析中,一类是先经抽提、分离;然后再显色定量。另一类是直接向血清中加入显色剂。
• 由于胆固醇的呈色反应特异性较差,直接测定往往受血清中其它因素的干扰,故测得结果不如先抽提、分离后再显色准确。
• 目前常用的化学测定法有醋酐-硫酸显色法和三化铁-硫酸法。– 前者操作简便快速,但显色稳定性较差,血清色素的干扰较大;– 后者灵敏度高,显色稳定,较醋酐-硫酸法优越。
醋酐-硫酸显色法
• 醋酐能使胆固醇脱水,再与硫酸结合生成绿色化合物,反应式如下:

高铁-硫酸显色法显色法
用异丙醇沉淀血清蛋白质,提取上清液中的胆固醇,再用氧化铝吸附胆红素、磷甘油等干扰物,离心后于上清液中加入高铁-硫酸试剂,反应产物显紫红色,其显色程度与TC含量成正比。
酶 法

• 可通过比色法求得血清总胆因醇的含量。上述三个酶的催化作用呈连锁反应,实验中把三个酶配成单一试剂,便于使用。
• 试剂中除上述三种酶外,还有胆酸钠和表面活性剂,胆酸钠用于激活胆固醇酯酶,表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。• 酶法操作简便,快速,专一性强,不需抽提,试剂无腐蚀性,是目前常规方法,但也存在有一些不足,如胆固醇酯酶对胆固醇酯水解不完全,表面活性剂影响胆固醇酯酶活性,黄疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低等。
血清总胆固醇(TC)测定
【参考值】 3.00~5.20mmol/L;
危险阈值:5.20~6.20mmol/L;
高胆固醇血症:≥6.20mmol/L。
【临床意义】
1.TC升高
甲状腺功能减退症、糖尿病、肾病综合征、胆总管阻塞、长期高脂饮食、精神紧张或妊娠等。TC增高是冠心病的危险因素之一。
2.TC降低
重症肝脏疾病,如急性重型肝炎、肝硬化等,严重贫血、甲状腺功能亢进症或重症营养不良。
实验操作

•混匀后置于37 ℃水浴中保温15 min,用空白管调零,在500 nm波长处测定吸光度。
计算

• 参考值
– 正常值:3.0~5.20 mmol/L;
– 危险阈值:5.20~6.20 mmol/L;
– 高胆固醇血症:≥6.20 mmol/L。
讨论
• 结合参考值范围分析实验结果
•思考题
– 血红蛋白、胆红素、维生素C对本实验结果有干扰,为什么?
– 基础液配制中胆酸钠的作用是什么?

