实验四 血糖含量的测定

Serum Glucose Test (GOD/POD Method)

实验目的

1. 掌握酶法测定物质含量的基本原理与方法

2. 掌握血清葡萄糖浓度测定方法（葡萄糖氧化酶法）

3. 了解口服葡萄糖耐量试验（OGTT)的测定方法与临床意义

实验原理

• 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

• 过氧化氢在过氧化物酶 (peroxidase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物。 (Trinder反应) • 红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。

实验试剂

1．0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）

2．酶试剂 取过氧化物酶12 000 U，葡萄糖氧化酶1 200 U，4-氨基安替比林10 mg，叠氮化钠100 mg，溶于磷酸盐缓冲液80 mL中，用磷酸盐缓冲液定容至100 mL，置4℃保存。

3．酚溶液 称取重蒸馏酚100 mg溶于蒸馏水100 mL中，用棕色瓶贮存。

4．酶酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4 ℃可存放1个月。

5．葡萄糖标准工作液（5 mmol/L）

实验操作

混匀，置37 ℃水浴中，保温25 min，在波长510 nm处，以空白管调零，读取标准管及测定管的吸光度。

计算

参考值

3.89~6.11 mmol/L

讨论

结合参考值范围、临床意义等分析实验结果。

思考题

– 标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯甲酸钠，苯甲酸钠起什么作用？

– 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？