实验一基本操作【实验目的】

1．熟练掌握刻度移液管与微量可调式移液 器的使用方法。

2．掌握正确记录、处理与分析实验数据的方法。

3．了解量具的校正原理与方法。

问题：如果要将一定量的溶液从一容器转移到另一个容器，用什么量具？是否精准？

一、刻度吸量管(pipette)的分类和操作方法

（一）分类

          – 10ml, 5ml, 2ml, 1ml, 0.5ml, 0.2ml, 0.1ml等。

（二）刻度吸量管的操作方法

1．使用前：

首先要看刻度吸管标记、刻度标线位置等。

2．吸液：

用右手的拇指和中指捏住刻度吸管的上端，将管的下口插入 欲吸取的溶液中；左手拿洗耳球，将洗耳球内空气排出，接在 管的上口把溶液慢慢吸入至刻度以上，立即用右手的食指按住 管口。

3．调节液面：

将刻度吸管向上提升离开液面，略为放松食指（有时可微微 转动吸管）使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底 部与标线相切为止（看刻度时，应将刻度吸管的刻度与眼睛平 行），立即用食指压紧管口。将尖端的液滴靠壁去掉，移出刻 度吸管，插入承接溶液的器皿中。

4．放出溶液：

刻度吸管下端紧靠锥形瓶内壁，稍松开食指，让溶液沿瓶壁 慢慢流下，流完后管尖端接触瓶内壁停留数秒后，

再将刻度吸 管移去；若刻度吸管上标有“吹”，则需将管内残余液体吹出。

二、微量可调式移液器（micropipette, 俗称“加 样枪”）的构造和使用方法

（一）微量可调式移液器的规格

• 5 ml移液器(1000-5000ul)

• 1ml移液器(200-1000)

• 200ul移液器(20-200)

• 100ul移液器(20-100ul)

• 10ul移液器(0.5-10ul)

• 2 ul移液器(0.1-2ul)

（二）移液器及配套吸嘴（俗称枪头，tip）

（三）移液器常用的盛接容器

（四）微量可调式移液器的构造

（五）微量可调式移液器的原理

• 1956年，由德国生理化学研究所的科学家Schnitger发明。

– 活塞冲程加样

– 活塞冲程(空气垫)加样器的结构是空气垫、活塞。

– 空气垫的作用是将吸于塑料吸头内的液体样本与加样器内 的活塞分隔开来；活塞在加样器内作弹簧样运动，通过空 气垫带动液体进入吸头中。

（六）微量可调式移液器的操作方法

1. 量程的调节

千万不要将按钮旋出量程以外（！！！），否则会卡住内 部机械装置而损坏了移液器。

2. 枪头（吸头）的装配

• 将加样枪垂直插入枪头（pipette tips）中，稍微用 力左右微微转动即可使其紧 密结合。

•      注意：不要使劲地在枪 头盒子上敲，这样会导致移 液枪的内部配件（如弹簧） 因敲击产生的瞬时撞击力而 变得松散，甚至会导致刻度 调节旋钮卡住。

3. 吸液

吸取液体前，先用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器 保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米。然后慢慢松开 按钮回原点，取出加样枪。

4．放出溶液

将加样枪加入盛接溶液的器皿中，将按钮按至第一停点排 出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点（终点）吹出残余 的液体。最后松开按钮。

5. 弃枪头

按下加样枪上的枪头推出杆，将枪头打入指定位置。

 ——综上所述，微量可调式移液器的完整操作步骤：

1. 量程的调节：

千万不要将按钮旋出量程（！！！），否则会卡住内部机械装置而损 坏了移液枪。

2. 枪头（吸头）的装配

将加样枪垂直插入枪头（pipette tips）中，稍微用力左右微微转动即 可使其紧密结合。不要使劲地在枪头盒子上敲，这样会导致移液枪的内 部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻 度调节旋钮卡住。

3. 吸液

吸取液体前，先用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状 态，将枪头插入液面下2－3毫米。然后慢慢松开按钮回原点，取出加样 枪。

4．放出溶液

将加样枪加入盛接溶液的器皿中，将按钮按至第一停点排出液体，稍 停片刻继续按按钮至第二停点（终点）吹出残余的液体。最后松开按钮。

5. 弃枪头

按下加样枪上的枪头推出杆，将枪头打入指定位置。

注意事项

• 移液器的正确放置 当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒

置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。

• 维护保养时的注意事项

（1）如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于 松弛状态以保护弹簧；

（2）最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60     ％的异丙醇，再用 蒸馏水清洗，自然晾干。

（3） 校准是可以在20-25度环境中，通过重复几次秤量蒸馏水的方 法来进行。

三、实验结果的数据处理(Data Processing)

•准确度（accuracy）

•误差（error）：系统误差、偶然误差

•精确度（precision）

•偏差（deviation）：绝对偏差、相对偏 差、标准偏差

（一）准确度和误差（Accuracy and Error）

1.定义

– 准确度（accuracy ）： 分析结果与真值相接近的程 度

• 准确度的高低用误差表示

– 误差（error）：测定结果（X）与真实值（XT）之间 的差值

2.表示方法: 绝对误差和相对误差

– 绝对误差（absolute error） ：E=X-XT

– 相对误差（relative error）:Er =*100%

3. 误差产生的原因

• 系统误差

– 由于分析过程中某些固定的原因所造成的误差.

1.性质

（1）单向性、重复性

（2）与测定次数无关

（3）可以校正，大小、正负可以测定

2.产生的原因

（1）方法误差

（2）仪器和试剂误差

（3）操作误差

（4）主观误差

3.校正：  改变方法，校正仪器，采用高等级试剂等。

• 偶然误差

1、性质

（1）大小可变

（2）方向不定，有时正、有时负。

（3）只能减小，不能消除。

2、产生的原因：

温度、气压、湿度、仪器性能的微小改变、人为的终 点判断的变化等。

3、校正：不能消除，只有增加平行实验次数。

（二）精密度与偏差(Precision and Deviation)

1.定义

（二）精密度与偏差

(Precision and Deviation)

• 精密度: 在相同条件下,各次分析结果相互间接近的程度.

– 精密度的高低用偏差表示.

• 偏差: 测定结果（X）与平均值（X）之间的差值

– 偏差小,表示数据集中,精密度高;反之,数据分散,精密 度低.

– 偶然误差影响分析结果的精密度.

2.表示方法

(1)绝对偏差和相对偏差 绝对偏差(absolute deviation, di) ：

di=单个测量值(Xi)－平均值(X  )

相对偏差(relative deviation, dr) ：dr =di/X*100%

(2)标准偏差(standard deviation，SD or S)

相对标准偏差(Relative Standard Deviation, RSD)，又称  变异系数(Coefficient of Variation, CV)

CV =S/X*100%

                                          微量可调式移液器的准确度与精密度(如下图)

【 微量可调式移液器系统误差的校正】

• 校准方法 ？

• 必须考虑的环境与仪器的影响因素？

–   温度、湿度、天平的精度、水的纯度等

• 如何消除偶然误差的影响？

【电子天平】

一.简介

• 用电磁力平衡被称物体重力的天平称之为电子天平。

• 它是传感技术、模拟电子技术、数字电子技 术和微处理器技术发展的综合产物，具有自 动校准、自动显示、去皮重、自动数据输出、自动故障寻迹、超载保护等多种功能。

• 电子天平的心脏-重力电磁传感器簧片，细而 薄,极易受损，使用中应特别注意保护, 不 要向天平上加载重量超过其称量范围的物体

（注意称量范围）

• 电子天平对环境高度敏感, 使用时应小心操 作, 安装台面应无明显振动；注意要调整底 角螺丝使水平指示器的气泡居中（调水平）

二.电子天平的使用方法

• 操作方法

– 水平调整 观察天平上的水平仪内的气泡是否位于圆环的中央。如果不在中央，调节两个地脚螺栓，使天平处于水平状态。

– 开启电源 按O/T键，仪器自检，出现0.000 g。

– 去皮 按O/T键，仪器自动除去称量容器或称量纸的质量。

– 称量 将被称量物放入容器或称量纸内, 显示屏显示带单位的被称量物的质量值。

– 关闭电源 按住Mode Off键直到屏幕出现Off后松开。

• 注意事项

– 称量范围

– 精密度

【实验操作】

1．刻度吸量管的操作练习。

2．微量可调式移液器的操作练习。

3．给定量具，转移定量液体。在电子天平上称量转 移液体的质量，记录实验数据。（注意：每组数据均需测定3次以上的平行数据）。

4．对测量数据进行准确度和精密度的评估，计算量具容量的校正值。

思考题

• 你所使用的吸量管和微量可调式移液器的准确度和精密度如何？

• 为减小误差，在实验操作中需注意哪些问题？