直播课视频:引物设计
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引物设计通常有两大方面的应用,一个是用于诊断和检测,如新冠核酸试剂检测所用的荧光定量PCR中,这一应用要求引物特异性高,不能有非特异性的结合,以免引起假阳性扩增。同时要求扩增效率高,以提高检测的灵敏度,扩增序列通常为某个基因内部高度保守,且和其它生物基因序列有差异的片段,扩增长度较短,如300bp左右。
另一种是用于基因的克隆表达,例如扩增表达新冠病毒spike蛋白基因用于疫苗或者抗体的研究等,本直播课程主要介绍了基因克隆表达时引物的设计原则,并以扩增spike蛋白为例,详细介绍了相关引物设计软件的应用,以及引物设计的原则。
引物设计可以使用primer premier软件商业软件,也可以使用免费的共享软件,如perlprimer:https://mooc1.chaoxing.com/coursedata/sharedResource?key=NTSYn%2Bw55RORXZEJVe716I1/N8n9v6U6GPTxlOQ3ku8%3D
在本例中使用了pET22b质粒载体,该载体的详细说明可以参看以下文档,下载地址为:https://mooc1.chaoxing.com/coursedata/sharedResource?key=nSl9V7UaWZSbvsG9wQOVm9BRKdKBu57SYiU1KRdspUk%3D
对于酶切效率,同学们可以参看下面的文档

