1．破坏脑和脊髓  取一只蟾蜍，用自来水冲洗干净。用左手的中指和无名指夹住蟾蜍的前肢，躯干和后肢握在手里，拇指前推、食指压住头部前端使头前俯。右手持探针自枕骨大孔垂直刺入，左右划动横断脑和脊髓。接着将探针向前刺入颅腔，左右搅动充分捣毁脑组织。然后将探针沿原路撤回至进针点（不要拔出），转向后刺入椎管，反复上下提插、捻动充分捣毁脊髓。此时如蟾蜍的呼吸停止、四肢松软，表明脑和脊髓已完全破坏，否则重复上述操作再行捣毁。

2．剪除躯干上部和内脏  蟾蜍脊柱下端有一明显变宽处为蟾蜍的骶髂关节。在骶髂关节水平以上1.5～2cm处剪断脊柱，再沿后段脊柱侧面剪开两侧皮肤，此时蟾蜍的躯干上部和内脏自然下垂，用粗剪刀剪除躯干上部和内脏，仅留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经丛。

3．剥皮  左手持大镊子夹住脊柱断端，右手捏住其上皮肤的边缘，向下剥掉全部后肢的皮肤。然后将标本放在盛有任氏液的培养皿中。  

4．洗手和全部用过的手术器械。  

5．分离左右下肢  用大镊子夹住脊柱断端将标本背面向上脊柱呈水平提起，剪除向上突起的骶尾骨，然后将标本翻过来腹面向上沿正中线将脊柱剪为两半，并于耻骨联合中央剪开两侧大腿。标本放回盛有任氏液的培养皿中。   

6．制备坐骨神经-胫腓神经标本 

（1）游离坐骨神经  在蛙板上铺一块纱布并滴上少许任氏液。取一侧后肢腹面向上放于蛙板上，用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经丛。然后将标本背面向上，循坐骨神经沟（股二头肌和半膜肌之间的肌间沟）游离坐骨神经大腿部至腘窝，剪断坐骨神经的所有分支，保留约1cm长与坐骨神经相连的脊柱后剪断脊柱。

（2）完成坐骨神经-胫腓神经标本  自腘窝沿神经走行在腓肠肌两侧肌间沟内游离出胫神经和腓神经直至足趾，用眼科剪刀剪除所有细小神经分支。将制备好的神经标本放在盛有任氏液的培养皿中备用。