请通过本章学习，回答下列问题：

[1]免疫层析试验和免疫渗滤试验的原理？

[2]固相膜免疫分析技术的临床应用？

第一节  概述

1.固相膜免疫分析：简便、快速、稳定、便于保存运输、结果判定容易，主要用于患者床旁、野外现场、家庭检测等，在医学、动植物检疫、食品安全监督等领域应用广泛。

2.常用固相膜：玻璃纤维素膜、尼龙膜、硝酸纤维素膜等。

3.膜的特点：具有很好的均一性，本身疏水，制作过程中加入表面活性剂，成为亲水性，对蛋白具有较强吸附能力。膜的孔径μm大小，渗滤法和层析法使用的膜孔径大小不同，膜表面液体流速与孔径大小有关。

4.膜免疫技术中标记物种类：酶和有色微粒子（彩色胶乳、荧光素、胶体金、胶体硒等）。

第二节  免疫层析试验（ICA） 

1.检测原理：样品在膜表面泳动，同时发生特异性结合反应，结合后被固定在膜上特定区域，可显色并观察。

2.方法类型：

（1）双抗体夹心法测大分子抗原

（2）竞争法测小分子抗原

（3）间接法测抗体：常采用反流免疫层析试验排除非特异性抗体的干扰

（4）荧光免疫层析试验

3.结果判定：两条线阳性，一条线阴性，无线无效；竞争法判定相反。

第三节  免疫渗滤试验（IFA）

1.检测原理：样品滴在膜上并穿膜，同时发生特异性结合反应，结合后被固定在膜上特定区域，形成斑点。

2.方法类型：包括双抗体夹心法测抗原和间接法测抗体（干扰较多，应用较少）

3.结果判定：

第四节  斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）

1.检测原理：原理与ELISA相同，只是固相载体由孔板转变为膜，最终底物由可溶性液体变为不溶性斑点。

2.结果判定：注意在膜上反应时底物影响斑点的颜色和大小。

3.方法学评价：吸附能力强，灵敏度较ELISA高6～8倍；多种抗原包被在一条膜上，同时检测；结果可保存。

第五节  免疫印迹试验（IBT）

1.检测原理：高分辨凝胶电泳和免疫反应相结合的检测技术。

（1）蛋白免疫印迹试验：抗原电泳分离→转膜→膜上抗原抗体反应→显色

（2）重组免疫印迹试验（RIBA）：纯化抗原或合成抗原→包被膜上→抗原抗体反应→显色

2.技术要点：可用于病原体或自身抗体的检测，检测方法有放射自显影、底物化学发光法、底物荧光法、底物显色法等。

3.方法学评价：特异性强、可用于确认试验；吸附蛋白能力强；可溶是检测多种抗体；膜条可重复检测应用。

第六节  影响固相膜免疫试验的主要因素

1.试剂方面：厂家选择、试剂检查等。

2.标本处理：主要包括样品保存和样品前处理，前处理应注意标本的类型和特殊标本（溶血、脂血、黄疸）。

3.实验过程：室温平衡、反应温度时间、结果判定等。

第七节  固相膜免疫分析技术的临床应用

心肌标志物、感染性疾病、自身免疫疾病、肿瘤标志物、生殖相关、性相关疾病、过敏原、毒品等检测。