请通过本章学习,回答下列问题:
[1]什么是免疫沉淀试验?
[2]免疫浊度测定的原理和类型?
[3]散射免疫比浊和透射免疫比浊的原理及区别?
[4]免疫固定电泳的原理及临床应用?
[5]免疫沉淀试验的临床应用?
[6]影响免疫凝集试验的主要因素有哪些?
第一节 免疫凝集试验的基本原理
1.免疫沉淀试验:可溶性抗原+特异性抗体+适当条件→沉淀现象
2.基本原理:抗原抗体按比例结合后可形成沉淀、浊度或沉淀线/沉淀环,并可进行定量计算。
3.免疫沉淀试验的分类:
(1)液相免疫沉淀试验:絮状免疫沉淀试验、透射免疫比浊试验和散射免疫比浊试验。
(2)凝胶内免疫沉淀试验:免疫扩散试验和免疫电泳技术。
4.免疫沉淀试验的特点:阶段性、特异性、抗原性质、抗体性质等。
第二节 液相免疫沉淀试验
1.絮状免疫沉淀试验:形成肉眼可见的絮状沉淀物,受抗原抗体比例的影响明显,可用于最适比例测定。
(1)抗原稀释法:固定抗体浓度,倍比稀释抗原,出现沉淀物最多的管为抗原最适比例管。
(2)抗体稀释法:固定抗原浓度,倍比稀释抗体。
(3)方阵滴定法/棋盘滴定法:抗原抗体同时倍比稀释,根据出现最大沉淀量时抗原抗体稀释度确定比例。

2.免疫浊度测定:比例合适和增浊剂作用下,抗原抗体反应后可形成较大免疫复合物,使反应液出现浊度,可以干扰光线,利用仪器检测;当固定抗体量,浊度随抗原量增加而增加,呈正相关,可定量检测。具有五大优点:稳定性好、敏感度高、精确度高、简便快速、易于自动化。

(1)透射免疫比浊试验:一定波长光线通过反应液,可被免疫复合物吸收或反射,用吸光度表示,吸光度与免疫复合物含量成正比。优点:操作简便、快速、结果准确性好、自动化、敏感性较高;缺点:抗体用量大、耗时相对长、比例极度不合适时,可致免疫复合物分离,影响准确性,不能用于半抗原检测。
(2)散射免疫比浊试验:一定波长光线通过反应液,可被免疫复合物散射,散射光强度与免疫复合物含量和散射夹角成正比,与入射光波长成反比,固定夹角和波长,保持抗体过量,免疫复合物含量与抗原量成正比。
①终点/定时散射比浊试验:抗原抗体反应达到平衡时测定散射光强度,在反应最初不稳定阶段之后,相互聚合形成絮状沉淀之前完成测定。优点:敏感度高、可自动化;缺点:不适于快速检测和微量检测。
②速率散射比浊试验:抗原抗体结合反应的动力学测定方法。测定的是单位时间内形成免疫复合物的量,抗原抗体反应过程中,免疫复合物的形成速率有一个峰值,即速率峰,峰值与抗原浓度呈正相关。优点:速度快、灵敏度高、精密度高、特异性强、稳定性好、检测范围宽、自动化程度高、节省试剂;缺点:仪器试剂贵、对抗体质量要求高。
(3)胶乳增强免疫浊度测定:为提高反应液浊度,将反应抗体吸附于均已的胶乳颗粒上参与反应,单个胶乳颗粒不阻碍光线透射,但形成免疫复合物后,多个胶乳颗粒聚集,可使透射光减少,减少程度与胶乳颗粒聚集程度成正比,即与待测抗原含量成正比。


