请通过本章学习,回答下列问题:
[1]补体总活性测定原理和方法?
[2]单个补体成分测定的原理和方法?
[3]简述补体参与试验的类型?
[4]补体测定的临床意义?
第一节 血清总补体活性的测定
1. CH50:以红细胞溶解为指示,以50%溶血为判定终点,常用于经典途径的补体活性测定(CP-CH50)。
2. CP-CH50测定原理:①利用绵羊红细胞(SRBC)和相应抗体(溶血素)作为溶血指示系统,补体与二者结合后可使SRBC溶血,溶血程度与补体活性(含量)相关;②以溶血百分率为纵坐标,补体含量为横坐标作图,可得“S形曲线”,曲线上溶血百分率在30%~70%之间几乎呈直线,补体稍微变动会引起溶血程度明显改变,表明检测结果对补体含量变化敏感;③因此常以50%溶血作为判定终点,即CH50,引起50%溶血所需要的最小补体量(mL)为一个CH50单位(U),通过计算得出血清中总的补体溶血活性,计算公式为CH50(U/mL)=(1U/50%溶血时最小补体用量mL)×血清稀释倍数。
3. CP-CH50方法评价:相对简便、快速,虽敏感性低,但基本可满足血清总补体含量测定的要求;是对经典途径中补体各成分量和活性的综合水平的反应;反应收到太多因素的影响,因此应严格质控。
第二节 单个补体成分的测定
主要检测C3、C4、C1q、B因子和C1抑制物(C1INH)等五种成分,方法包括免疫溶血法和免疫化学法。
1. 免疫溶血法:检测包括指示系统、单个补体缺陷系统和待测血清补体三部分,三部分反应后如指示系统未出现溶血,提示待测血清补体缺陷与单个补体缺陷系统缺陷的补体一致。方法敏感性低,不能测定含量。
2. 免疫化学法:待测单个补体可与其相应抗体结合形成免疫复合物,可利用免疫比浊试验或酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。免疫比浊法简单、重复性和特异性好,且能进行自动化和标准化;ELISA操作简单、敏感性高、特异性强,也可以自动化。
第三节 补体参与的试验
1. 补体结合试验(CFT):包括反应系统(抗原和抗体)、补体系统和指示系统,用于抗原或抗体检测。
2. 补体依赖的细胞毒试验(CDC):包括靶细胞、抗体、补体和染料,用于靶细胞抗原特异性鉴定。
3. 免疫黏连血凝试验:包括病毒、抗体、补体和O型血红细胞,用于检测病毒抗原和抗体。
4. 溶血空斑试验:包括SRBC、免疫小鼠B细胞、补体和琼脂,用于抗体形成细胞的检测。
5. 胶固素结合试验:包括牛胶固素、放射性核素、免疫复合物、iC3b和PEG,用于循环免疫复合物的检测。
6. C1q抗体测定试验:包括C1q和C1q抗体,用于自身免疫性疾病患者血清中C1q抗体的测定。
第四节 补体测定的临床意义
1. 补体活性与含量增高:见于传染病、组织损伤、急性炎症、某些肿瘤患者等,以及心梗、妊娠、糖尿病等。
2. 补体活性与含量降低或缺陷:见于某些补体先天缺陷或补体消耗增多(自身免疫性疾病)、补体大量丢失(大面积烧伤、大出血、肾病综合征、大量体液丢失)、补体合成不足(肝病)。

