第一节  常用的体外抑菌试验

药物的体外体外抗微生物试验是在体外测定微生物对药物敏感程度的试验，已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的筛选、提取过程中抗菌活性的追踪、抗菌谱的测定、药物效价的测定、药物血液浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。

(一)体外抑菌试验

抑菌即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微生物，在药物除去后微生物又能生长。凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration，MIC)。体外抑菌试验是最常用的抗菌试验，方法简便，需时短，用药量少，不需要动物和特殊设备，一般是在玻璃器皿中进行的。常用的方法有连续稀释法和琼脂扩散法二种。

 1．连续稀释法：连续稀释法是一般细菌药敏试验及抗生素试验研究方面最主要的方法。可用于定量测定药物抑制微生物生长的能力。本法是用培养基将药物按两倍稀释成系列浓度，依次分装在一系列的容器中，于各容器内加入对该药敏感的试验菌，经过一定时间和温度的培养，观察各容器中试验菌生长情况而求出药物的最低抑菌浓度(MIC)。根据所用的培养基两倍稀释法可分液体法和固体法。

2．琼脂平板扩散法：琼脂扩散法是利用药物可以在琼脂培养基中扩散使其周围的细菌生长受抑制而形成抑菌圈，以抑菌圈直径的大小来评价药物抗菌作用的强弱。抑菌圈越大，说明试验菌对该药物越敏感。琼脂平板扩散法简单、快速，可同时进行多样品或多菌株的研究。但缺点是重复性差，干扰因素多。主要方法有：

(1)纸片法： 纸片法是琼脂扩散法中最常用的方法。适用于新药的初筛试验(初步判断药物是否有抗菌作用)及临床的药敏试验，可进行多种药物或一种药物的不同浓度对同一种试验菌的抗菌试验。首先将试验菌均匀混入琼脂培养基，制成含菌平板，然后用一定大小的滤纸片沾取药液置于平板上，培养后即可观察结果。根据抑菌圈直径的大小，评价药物抗菌作用的强弱。

(2)平板打孔法和平板挖沟法：平板打孔法在含菌琼脂平板上打孔，孔内加入药液，

经培养后根据抑菌圈直径判断其抗菌作用的强弱。平板挖沟法是先制备琼脂平板，在平板中央挖一条沟，沟两边垂直划线接种各种试验菌，在沟内加入药液。适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验菌的抗菌作用。

(3)熏蒸法：适用于含有挥发性抗菌物质（如薄荷、艾叶、挥发油等）的中草药。测试方法是在厌氧培养罐内进行，首先取一定浓度的细菌定量加在琼脂固体培养基上，菌液垂直流下。培养物置厌氧培养罐内，置37℃温箱培养24小时后取出观察结果。计算培养物上的菌落数，判断测试药物中挥发性物质抗菌作用的强弱。