实验七 中药制剂化学成分检识的基本技术
一、目的要求
通过实验要求
（一）掌握常用中药制剂成分的检识原理和技术。
（二）熟悉常用中药制剂质量控制的一般方法。
二、实验原理
本实验是将中药制剂先进行简单的提取，按化学性质分组制备供试液。如脂溶性成分、水溶性成分、酸性或碱性等几个部分。然后再将各部分作薄层或纸上点滴点反应，反应时宜采用通用试剂为主，这样既检出面广，又不易发生漏检。当某种试剂呈阳性反应时，还可结合其他试验方法的阳性结果，以及溶解度、酸、碱性等多方面情况进行分析，必要时再配合某些专用试剂作进一步验证试验，基本可以了解制剂中可能含有某类化学成分。例如某制剂的乙醚提取液和水溶液对氨性硝酸银试剂在不加热的情况下就产生灰黑色反应，表明其中含有还原性较强的成分。如果再对三氯化铁试剂产生绿色，对三氯化铝试剂产生强烈荧光变化、与碱液作用只呈黄色反应等，则表明制剂中很可能含黄酮成分。其乙醚提取液中可能有游离黄酮，其水溶液中可能含黄酮苷。
在初步确定了成分类别之后，再进一步将阳性反应的提取部分，选用适当的展开剂进行薄层或纸层层折，以分离该类成分中各种化合物，并选择适当的显色剂或进行荧光观察，以便和相对标淮制比较来判断制剂的质量是否相同。
（一）中药制剂供试液的制备
1.注射剂 取注射剂（2ml装置2支），一支加2N盐酸调pH＜3，另一支加2N氢氧化钠溶液调pH＞12，分别观察注射液的颜色变化和澄明度改变情泛，以了解制剂中含脂溶性成分的酸、碱性，然后分别用乙醚或乙酸乙酯率取二次，每次2～3ml，蒸发除去乙酸乙酯，残留物用数滴乙醇溶解，如不能金溶，可滴加数滴氯仿搅拌至溶，再将此混合溶液与有机溶剂萃取后的水层，调节pH呈中性后供试验。
2.片、丸剂及其他固体制剂，如果是用药材粉末直接制成的固体制剂，一般取5～10g，用75％乙醇回流提取1～2次。过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩液用乙醚或乙酸乙酯萃取二次，每次2～3ml，合并萃取液得脂溶性部分，水层中含水溶性部分。将脂溶性部分蒸发去溶剂，张留物中加数滴乙醇（或乙醇一氯仿混合液）溶能后供试验。
如为浸膏制成的固体制剂，其提取方法同上，但制剂的取样量可减为1g左右。如制剂外表包有糖衣者，可先行剥去糖衣，然后研磨成粉，再进行提取。
3.醇浸出制剂 取5～10ml制剂蒸发除去乙醇后再按上述固体剂的处理方法制备供试液。
（二）点滴反应
取硅胶薄层板或滤纸片，用铅笔划好格，将依照上述方法制备的供试液，点在横排的每个小方格中，再将各种试剂点在竖行中的每个小方格中，仔细观察并记录每个小方格中反应结果。最后根据各种试剂反应情况来判断制剂中可能含有各种成分类型和种类。必要时可选用某些专属性强的试剂作试管反应或点滴反应，更有助于结果判断。
供作点滴试验的通用试剂有：
1.三氯化铁试液
2.三氯化铁一铁氰化钾试液
3.氨性硝酸银试液
4.溴钾酚绿试液
5.香草醛╴浓硫酸试剂
6.醋酐一浓硫酸试剂
7.2.4-二硝基苯肼试液
8.三氯化铝试液
9.氢氧化钠试液
10.碘化铋钾试液
11.改良碘化铋钾试液
12.对-二甲氨基苯甲醛-盐酸试液
13.茚三酮试液
14.醋酸镁试液
16.紫外灯
表 某提取液薄层板（或滤纸）点滴反应
样品 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
某样品乙醚提取液 | ||||||||
某样品水提取液 | ||||||||
空白对照 |
1.三氯化铁试液
2.氨性硝酸银试液
3.2.4-二硝基苯肼试液
4.香草醛一浓硫酸试液
5. 茚三酮试液
…………。
（二）层析检查
根据点滴反应，呈阳性结果的供试液，必须进一步作薄层或纸层层析检查，仔细考查层析中出现的成分斑点数目。有关层析条件可以参考其他参考书籍，显色剂可采用反应中上呈阳性结果的通用试剂或各类中药化学成分的显色剂，宜选用灵敏度高的试剂。
三、实验内容
（一）芦丁片
取芦丁片1～2片，按上述“固体制制”项下规定制备供试液，取乙醚萃取液和水溶液分别作下述试验：
1.点滴反应
2.层析检识（用芸香苷和懈皮素对照）
3.层析材料 硅胶一ＣＭＣ薄层板
4.展开剂 正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1）或（4∶1∶5上层）
显色剂 三氯化铝或氨性硝酸银试液〔也可用聚酰胺薄层板，用乙醇∶水（２∶１或３∶１）为展开剂，显色剂同上。〕
（二）芦丁片中芸香甘的HPLC测定
流动相：甲醇：水=60:40
检测波长 254nm
流速 1ml/min
色谱柱 160mm*4.6mm*5μm C18
四、实验说明及注意事项
1.作点滴反应时应仔细观察反应结果，以结果较明显者定为阳性，对反应结果不明显或因供试液本身颜色较深或试剂的颜色太深，造成反应结果不易判断者，应多重复几次试验，或将供试液加以适当浓统后继续试验，必要时可另换试剂再作，务求实验结果得到正确的判断。
2.点滴反应的结果应及时观察和记录，因为有些试剂与硅胶接触时间稍长，即出观假阳性反应，如氨性硝酸银试剂、溴甲酚绿试剂等。
3.选用层析展开剂时，应首先考虑最常用的，再根据具体情况的要求作适当调整甚至改换其它展开剂，但原则是力求对供试品中各个成分都能较好得到分离。
4.选择显色剂时，要注意往往显色剂因易挥发不易保留，遇此在显色之后可用固色的办法戊刻划痕迹的办法处理，以便重复观察。
5.荧光观察展层的结果往往与显色斑点不是同一种成分，要分别记录结果以便分析研究。
