实验六 中药化学成分预试验
一、目的要求
通过实验要求：
（一）掌握中药化学成分预试验操作基本方法。
（一）熟悉预试验结果的判断方法。
二、实验原理
中药化学成分预试验是对天然药材中含有的化学成分类别进行的初步分析，目的在于了解成分的种类和多少，以便没计下一步提取和分离这些成分的方法流程或方案。预试验的过程大致可分为以下三个方面。
（一）供试液的制备
根据各类成分对各种不同极性溶剂的溶解度不同而划分为水溶性、醇溶性和石油醚性几部分，必要时还可以结合各种成分的酸碱性不同，采用酸或碱进行处理，分成含酸性、含碱性和含中性的化合物部分。若欲进一步判断含有成分情况，尚可根据各种成分的极性采用薄层或纸层层析的方法，最后作综合考虑。
（二）各类成分的识别反应
利用各种显色反应或沉淀反应，在试管中进行或在纸片（或薄层板）上作点滴反应。也可以配合薄层或纸层析方法、以得到更准确的实验结果，这种检识反应既可用于系统预试验，也可用于单项预试验法。在预试验中，应尽量采用灵敏度高的和专属性强的试剂和方法，并尽可能排除各种干扰的因素。要使检识反应结果的正确可靠，在试验的同时作相同条件的空白和对照试验。
（三）预试验结果的判断
根据检识反应的结果，初步判断该供试品中可能含有化学成分类型，但这种初步判断只能供作参考，不可作结论。因为在预试验中所使用的检识方法，往往不是专属性很强的，在有多种成分共存的情况下，必然存在相互干扰造成反应结果不明显或不正确，因此要作出恰当的结论就比较困难，这就要求能够熟悉根据检识成分的范围和方法（包括供试液的制备和层析结果），各种因素综合分析之后，再作出恰当的结论。
三、实验材料
预试验中的各种材料，可以选择有代表性的中药材或某种植物材料，数种至数十种；也可以选择某些易于检出的某种中成药制剂。要求学生能够作出样品中的主要成分的识别反应。
四、实验内容
（一）系统预试法
1.水溶性成分的检识
供试液的制备 取供试品粗粉5～10g，加10倍量水，浸泡过夜或于50～60℃水浴上温浸1h，过滤，滤液供检查下列各类成分。
（1）糖类、多糖和苷类
①、 α–萘酚反应（Molish 氏反应）
②、 费林氏反应（水解前后对比）
（2）氨基酸、多肽和蛋白质
①、 茚三酮反应△
②、 双缩脲反应
（３）酚类和鞣质
①三氯化铁反应△
③、 明胶－氯化钠反应
（4）有机酸
①、 pH试纸检查
②、 溴酚蓝反应△
（5）皂苷
①、 泡沫试验
②、 溶血试验
③、 醋酐一浓硫酸反应
2.醇溶性成分的检识
供试液的制备 取供试品粗粉10g、加10倍量乙醇，沸水浴上回流提取1h，过滤，滤液回收乙醇至无醇味（呈浸膏状），取出三分之一量，加20ml乙醇溶解，供作甲项检查。剩余三分之二的醇提浓缩物，加5％盐酸溶液20ml，充分搅拌、过滤，滤液供作乙项检查。酸水不溶部分，加10ml乙酸乙酯溶解，用50％氢氧化钠溶液萃取两次（每次2～3ml），弃去碱水层，用纯化水诜涤乙酸乙酯层1～2次，至水诜液呈中性，将乙酸乙酯层液置蒸发皿中，于热水浴上蒸发除去乙酸乙酯，残留物用15ml乙醇溶解，供作丙项检查。
甲项检查
①、 酚类和鞣质（同上）
②、 有机酸（同上）
③、 黄酮类
甲、 三氯化铝反应△
乙、 盐酸镁粉
丙、 氨熏试验△
④、 蒽醌类
甲、 苛性碱反应（Börntrager反应）△
乙、 醋酸镁反应△
（５）甾体和三萜类
甲、 醋酐一浓硫酸反应
乙、 氯仿一浓硫酸反应
丙、 三氯化锑反应△
乙项检查
生物碱
甲、 碘化铋钾试剂
乙、 硅钨酸试剂
丙、 碘化汞钾试剂
丁、 鞣酸试剂
丙项检查
（１）强心苷类
甲、 碱性苦味酸反应
乙、 碱性3.5-二硝基苯甲酸反应△
丙、 α–去氧糖反应
（２）香豆素和内酯类
甲、异羟肟酸铁反应△
乙、开环与闭环试验
丙、荧光试验
3.石油醚溶性成分的检识
供试液制备 取供试品粗粉2g，加石油醚10ml，浸渍2～3h，过活，滤液分置于白磁反应板的两个凹穴中，自然挥去溶剂后作（１）项检查，剩余滤液作（２）项检查。
（１）甾体和三萜类（同醇溶性成分甲项检蓟
（２）挥发油和脂肪油
甲、一般检查（滴供试液于滤纸片上，挥去溶剂后观察有无油迹和嗅之有无气味了
乙、显色反应（滴加香草醛一浓硫酸试剂后观察或滴加磷钼酸试剂观察）
4.氰苷类 取供试品粗粉1g，置于25ml锥形瓶中作下述试验。
（１）苦味酸钠试验
（２）普鲁氏蓝试验
5.硫苷类 取供试品粗粉1g，置于25ml锥形瓶中作下述试验。
（１）产臭试验
（２）醋酸铅反应
二、层析检识法
根据上述检出试验的结果，即可作出供试品所含成分类型的初步判断，再将供试液加以浓缩后供作层析检查。
五.说明及注意事项
（一）在系统预试验法中，各种捡出反应多在试管中进行，标有“△”者，表示可在硅胶–ＣＭＣ硬板或滤纸片上作点滴反应。
（二）通过对各类成分的检出反应，对反应结果明显的成分（对照试验结果亦相同），可以作综合分析判断结果；对反应结果不明显的成分（对照试验结果不尽相同），就不可轻易结论，应当进一步浓缩供试液，继续进行试验反应，必要时得配合层析检查。
（三）在对实验结果作判断时，应综合考虑多方面因素，如在有酚类反应时，应考虑到鞣质、黄酮、香豆素、蒽醌类等多种含酚羟基成分的干扰。
（四）预试验结果，通常只提供可能含有哪些化合物，可据此设计提取和分离的方法，直到做出正确的判断结果。
（五）如药材为叶或全草，其含叶绿素较多，应尽量先将叶绿素除去后再进行检查。
