实验五 三棵针中小檗碱的提取、分离和检识
一、 目的要求
通过实验要求：
（一）掌握小檗碱的提取和精制方法。
（二）熟悉小檗碱的性质和检识方法
实验原理
本实验是根据游离小檗碱可溶于水，其盐酸盐难溶于水的性质进行提取的。提取的原料可选用黄连、三棵针、十大功劳、黄柏皮等。
二、 实验材料
三棵针粗粉； 稀硫酸（0.3％）；石灰乳（新制）；浓盐酸；氢氧化钠试液；丙酮；稀硫酸（10％）；漂白粉；精制食盐；广泛pH试纸；活性炭；浓硝酸；层析滤纸（6×500px）或薄层层析板；正丁醇:醋酸:水（7:1:2）或（4:1:1）
三、 实验内容
（一）提取
方法一 称取三棵针根粗粉20g，用0.3％硫酸溶液（药材:酸液＝1:10）200ml室温浸泡24h，过滤，收滤液；药渣同法操作一次，合并两次滤液，用石灰乳调滤液pH 10～12，静置过夜，过滤，滤液加入精制食盐使含盐量达6％的浓度，静置过夜，布滤，即得小檗碱粗品。
方法二 称取三棵针根粗粉20g，用0.3％硫酸溶液（药材:酸液＝1:10）200ml湿润10min，放入中药超声处理机处理30min，取出，过滤，药渣再用200ml0.3%的稀硫酸超声提取30min，过滤，合并两次滤液，用石灰乳调滤液pH 10～12，静置过夜，过滤，滤液加入精制食盐使含盐量达6％的浓度，静置过夜，布滤，即得小檗碱粗品。
（二）精制
将上述得到的粗制小檗碱（勿需干燥）置于烧杯中，加入约50倍纯化水（的80ml），煮沸1分钟，搅拌使充分溶解，迅速抽滤，不溶物可再加纯化水30～40ml再煮一次，滤过，合并滤液，加浓盐酸调声pH1～2，放冷即可析出盐酸小檗碱精制品，减压过滤，并用少量70％乙醇洗涤结品，于80℃以下干燥，称重，计算提取率。
粗制品盐酸小檗碱亦可用乙醇为溶剂精制，将粗制品加50～60ml 95％乙醇，活性炭0.5g，水浴上回流煮沸半小时，抽滤，滤液放冷即析出盐酸小檗碱精制品，于80℃以下干燥即得。
（三）检识反应
1.取盐酸小檗碱（实验产品）约50mg，加纯化水５ml，缓缓加热使溶解，加氢氧化钠试液2滴，产生橘红色，溶液经放冷后，过滤，滤液中加丙酮数滴，即产生黄色丙酮小檗碱的浑浊或沉淀。
2.取盐酸小檗碱（实验产品）少许，加稀硫酸2ml温热溶解，再加漂白粉少许，振摇后即产生樱红色。
3.于盐酸小檗碱的水溶液（3～4ml），滴加浓消酸数滴，溶液产生黄绿色硝酸小檗碱沉淀。
（四）纸层析检识（或用薄层层析检识）
层析材料 中速层析滤纸（5×500px）
展开剂 正丁醇:醋酸:水（7:1:2或4:1:1）
显色剂 紫外灯下观察荧光或自然光下观察黄色斑点
对照品 0.1％盐酸小檗碱醇溶滤
供试品 实验产品醇溶液
层析操作 取层析滤纸或薄层板（己活化），于一端50px处用铅笔画起始线并画出等距离两个原点标记，然后用毛细管分别点样（供试品与对照品各一个）在原点上，待样点溶剂挥干后，进行展开，当展开滤纸或薄板1/2～2/3距离时，即可取出，用铅笔画下展层的前沿，用电吹风冷风吹至干，观察黄色斑点位置和数目，比较样品与对照品的Rf值。
（五）小檗碱的紫外吸收图谱
取小檗碱产品，用甲醇溶解，溶液用UNIC4806扫描，观察小檗碱的紫外吸收光谱。
（六）小檗碱的红外光谱图
分别取产品小檗碱少量与溴化钾混合磨细，放入压片机压成薄片，放入样品支架，用红外光谱仪进行扫描，并解析。
扫描方式：透过率。
扫描范围：4000-10000px-1。
扫描次数：20次。
四、实验说明及注意事项
（一）实验材料除可用三棵针外，也可用黄连、黄柏皮和十大功劳。
（二）三棵针等原料中除主要含小檗碱外，尚含一定量的小檗胺，药根碱和巴马亭等多种成分，除小檗碱、小檗胺含量多且有一定药用价值外，其他成分含量均少，且无分离必要。
（三）提取用稀硫酸浓度以在0.2％～0.3％之间，若加大稀硫酸浓度，小檗碱将会从硫酸盐转变成硫酸氢小檗碱（B.HSO4）-酸式盐的形式，后者的溶解度（1:100）明显地较硫酸盐（1:30）为小，影响提取效果。
（四）加氯化钠的目的是利用其盐析作用以降低盐酸小檗碱在水中的溶解度。
（五）用作盐析用的食盐，除可用精制氯化钠外，也可应用市售细食盐。
（六）粗制盐酸小檗碱过程中，煮沸后的溶液应乘热迅速抽滤，以免溶液冷却而析出盐酸小檗碱结晶，造成提取率降低。
