实验四   槐米中芸香苷的提取、精制和检识

一、 目的要求

通过实验要求：

（一）掌握用槐米提取、精制芸香苷的原理和操作方法。

（二）熟悉芸香苷的性质和检识方法。

二、 实验原理

本实验主要利用芸香苷在碱水中成盐而增大溶解能力，用碱水（石灰水）为溶剂煮沸提取，碱水提取液加酸酸化后又可析出芸香苷的结晶，并利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

三、实验材料

   槐花米（当年采收或放置不过二年者）；   0.4％硼砂水溶液；   2％稀硫酸溶液

   10％氢氧化钠溶液；   石灰乳；   广泛pH试纸；   氨性硝酸银试液；   镁粉；   浓盐酸；   中速层析滤纸；   正丁醇:醋酸:水（4:1:5上层）；   氨水；   1％三氯化铝乙醇溶液；1％葡萄糖溶液；1％鼠李糖溶液；1％槲皮素乙醇溶液；1％芸香苷乙醇溶液；40％氢氧化钠溶液；   碳酸钡；   锥形瓶（250ml）；   小漏斗；   止爆剂

四、 实验内容

   （一）芸香苷的提取

   称取槐花米20g（压碎），加0.4％硼砂水溶液200ml在搅拌下加右灰乳调pH 8～9，加热煮沸半小时，随时补充失去的水分和保持值pH 8～9，倾出上清液，用四层纱布过滤，同样操作再提取一次，合并两次提取液，放冷，用浓盐酸调pH 2～3，放置析晶，待结晶全部析出后，减压过滤，用纯化水洗涤芸香苷粗品，抽干，室温下晾于，得粗制芸香苷，称重，计算提取率。

   （二）精制

取粗制芸香苷2g，加热纯化水400ml，煮沸至芸香苷全部溶解，趁热立即抽滤，，冷却滤液后即可析出结品，抽滤，得芸香苷精制品。晾干，称重。

（三）芸香苷的检识反应

1.成盐反应   取芸香苷10mg左右，置试管中加纯化水2ml，，振摇，观察试管有无变化，滴加1％氢氧化钠溶液数滴至呈碱性反应，振摇使芸香苷全郭溶解成为黄色溶液，然后再滴加1％盐酸溶液数滴至呈酸性反应，溶液则由澄明转为浑浊状态（若当时不出现浑浊时可放置片刻或置冰箱中冷冻一定时间后再观察）。

2.盐酸镁粉反应   取芸香苷少许，置于试管中，加乙醇2ml置热水浴中微温至溶解后，加入金属镁粉少许、浓盐酸2～3滴，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。

   （四）芸香苷的水解

   取芸香苷1g，研细后，置250ml锥形瓶中，加乙2％硫酸溶液80ml，瓶口上放置一只小漏斗，然后煮沸瓶内液体，并随时补充瓶内失去的水分，大约煮沸2h后，瓶中浑浊液径过溶解变澄清，又变棕黄色液体，最后转变为鲜黄色沉淀（不再变化）为止，放冷、抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体）作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（即槲皮素），用纯化水诜沉淀物至中性，抽干水分，晾干，称重。得粗制槲皮素。再用甲醇重结品即得精制槲皮素。

（五）芸香苷及槲皮素的纸层析

 层析材料   中速层析滤纸（5×500px）

 展开剂   正丁醇:醋酸:水（4:1:5上层）

 显色剂   自然光或紫外光灯下观察，喷洒三氯化铝乙醇溶液后再于紫外灯光下观察。

 供试品   实验产品1％槲皮素乙醇溶液及1％芸香苷乙醇溶液。

   对照品   1％槲皮素乙醇溶液与1％芸香苷乙醇溶液。

（六）糖的纸层析检识

层析材料   中速层析滤纸（5×500px）

 展开剂   正丁醇:醋酸:水（4:1:5上层）

 显色剂   氨性硝酸银试液，喷洒后先用电吹风冷风吹干，再吹热风至出现色斑为止。

 对照品   1％葡萄糖水溶液及1％鼠李糖水溶液。

   供试液   取水解芸香苷之后的滤液10ml，水浴上加热，在搅拌下加适量碳酸钡细粉中和至中性（pH７），过滤除去沉淀物，滤液经浓缩至2ml左右，放冷后供纸层析点样用。

（七）芸香苷及槲皮素的紫外吸收

仪器    紫外-可见分光光度计

试剂    甲醇钠、硼酸钠、碳酸钠、三氯化铝、盐酸

所加试剂	位移情况	酚羟基可能的位置
芸香苷（甲醇溶剂）
甲醇钠
乙酸钠
乙酸钠/硼酸
三氯化铝
三氯化铝/盐酸

（八）芸香苷与槲皮素的红外光谱

分别取产品芸香苷与槲皮素少量与溴化钾混合磨细，放入压片机压成薄片，放入样品支架，用红外光谱仪进行扫描。

扫描方式：透过率。

扫描范围：4000-10000px^-1。

扫描次数：20次。

五、实验说明及注意事项

（一）在煮沸提取过程中，使用石灰乳调pH8～9时应严格控制不得超过pH10，因为在强减条件了煮砩，时间稍长就可促使芸香苷水解破坏，使提取率明显下降。

（二）提取过程中加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中的邻二酚羟基不与钙离子络合，使芸香苷不受损失。