实验三 硅胶薄层板的制作和应用
一、目的要求
通过实验要求：
（一）掌握硅胶薄层板制板方法。
（二）了解硅胶薄层层析操作基本技术。
二、实验原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值（后面介绍Rf值）对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。
三、实验材料
大黄提取液、大黄素、大黄酚、大黄酸；石油醚（60-90）—甲酸乙酯—甲酸（16:5:1，上层）；硅胶H或硅胶G；羧甲基纤维素钠（CMC–Na）；Co(N03)2.6H20；一端拉细的玻璃管、脱脂棉、蒸馏水、滴管。
四、实验内容
1.硅胶G薄层 取硅胶G 1份，置研钵中，加加0.5%羟甲基纤维素钠约2-3份，充分研匀成稀糊状，倒入涂布器内，均匀涂布，使成为约0.25～0.5毫米厚度，表面平整均匀的薄层板，水平放置、晾干。必要时于110℃活化1～2小时。放冷后贮于干燥器中备用。一般鉴别水溶性化合或某些极性大的化合物时，所用薄层板只需在空气中晾干后，即可保存备用，勿需加热活化。
2.硅胶G薄层版应用
（1）制板 按上述方法制备大小约20×125px氧化铝软板一块。
（2）点样 用铅毛薄层板板下瑞50px处轻轻触及薄层面作起始线标记，并作4个等距离位置原点标记，然后分别用毛细管蘸取各种样品，分别点在4个原点上；点样的斑点直径不得超过12.5px。
（3）展开 将点样的软板轻轻置于预先加入展开剂的层析槽中，勿使展开剂与薄层板接触，盖好槽盖放置半小时以进行饱和，半小时后调换层析槽下的支撑物进行展层。当展开剂展至薄层板全长2/3时，即可取出薄层板，用标记各个样品的位置， 用电吹风吹干薄层板，再用米尺量出前沿至原点的总长度和原点至各个色斑的长度。依以下公式计算各色斑的比移值（Rf）。
⑷结果判断 根据测量计算结果（Rf值），根据Rf值判断大黄提取液中可能含有的化学成分。
五、实验说明及注意事项
（一）要想得到比较理想的结果，在各步操作中都必须严格要求，点样的原点直径不应超过12.5px；展开时原点不可被展开剂淹没。
（二）点样量的多少，对有色化合物可直接观察，对无色化合物可预先取一块薄层板，按常规方法进行层析操作，但在点样时可分别在不同原点上点不同量的样品溶液，径展层显色之后，根据斑点的大小和颜色的深浅以确定最佳点样量。
（三）点样工具与点样要求（薄层层析用硅胶Ｇ硬板）：
⒈毛细管内径：约0.5mm。
⒉点样时，原点距离底边、距离二侧边以及点与点之间的距离均应大于37.5px。
⒊原点直径以3mm为宜。
⒋点样量以几～几十μg为宜。
⒌点样体积宜在20μl以下为宜。
图１ 薄层板点样示意图
