第四节  病毒的培养

病毒的培养基

活的敏感细胞（具备特异性受体，不对侵入的病毒核酸进行破坏、没有破坏特异性病毒限制性核酸内切酶）。

（一）噬菌体

噬菌体的培养特征

液体培养基内：原先浑浊的菌液变成透明的裂解溶液。

在固体培养基上：宿主细菌菌落上出现空斑（噬菌斑）。 

噬菌体效价的测定: 效价（titre，titer）：每毫升试样中具侵染性的噬菌体粒子数。可用营养琼脂平板法测定，即噬菌体标本经过适当稀释再接种敏感细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，即噬菌班（plague），或噬菌斑形成单位数（pfu），感染中心数. 

（二 ）动物病毒培养

已发现人类病毒300多种；脊椎动物病毒900多种。动物病毒的繁殖概括起来可分为：吸附、侵入、脱壳、生物合成、装配、释放六个连续步骤。

动物病毒的培养：动物接种、鸡胚接种（羊膜腔和尿囊腔）、组织培养。

（三）植物病毒

700余种，大多为ssRNA，一般无包膜，基本形态为杆状、丝状、球状。

植物病毒的繁殖特点：附及侵入通过人为地或自然的机械损伤所形成的微伤口进入细胞；或者靠携带有病毒的媒介，主要靠是有吮吸式口器的昆虫取食将病毒带入细胞。至今仍未发现植物病毒的细胞受体存在。植物病毒一旦进入细胞后，增殖产生的子代病毒或病毒核酸可通过病毒编码的运动蛋白与胞间连丝的相互作用从受染细胞进入邻近细胞。

知识连接：

人类免疫缺陷病毒(HIV:human immunodeficiency virus)和爱滋病（AIDS）；acquired immune deficiency syndrome)

1981年6月，美国向全世界报告了第一例艾滋病例。1983年首次分离出来人类免疫缺陷病毒。

病毒特点：分类学上属逆转录病毒科慢病毒属。RNA病毒、有囊膜、病毒核衣壳为正二十面体、病毒核心有两条相同的正链形成基因组双体结构，核心有核蛋白、逆转录酶、整合酶、蛋白酶等。所分离出的大量HIV已进行了克隆和序列分析。基因组RNA由9749bp组成。三个基本基因gag、pol、env基因，六个附加基因；HIV的基因及其表达产物已得到鉴定。主要攻击CD4+ T淋巴细胞亚群，引起患者体内T4辅助性淋巴细胞耗竭，导致免疫系统紊乱和免疫缺陷。

爱滋病的传播途径：性传播、血液传播、母婴传播。

4、SARS (Severe Acute Respiratory Syndrome)病原体--冠状病毒变种（corona virus）

2002年11月16日,中国广东佛山发现第一起后来可称为SARS的病例。此后在越南、中国香港、加拿大、美国等30多个国家和地区相继发现类似病例,传染性和死亡率极高。 

冠状病毒，是一种ssRNA(+)病毒，在电镜下，病毒颗粒呈不规则形，直径约为60~220nm,有包膜，其表面有梅花形的膜粒，状如日冕，故称为冠状病毒(coronavirus)。颗粒中心在负染电镜下呈不定形态，核壳体呈疏松状态。包膜上有两种糖蛋白：S蛋白：刺突糖蛋白，是主要的抗原，与受体结合，使细胞融合。M蛋白：跨膜，参与包膜形成。在一些亚类中，还有第三种糖蛋白,HE——红细胞凝集素酯酶。基因组RNA与碱性磷酸蛋白N结合。