MS培养基的配制及灭菌
一实训内容
MS培养基配制及灭菌。
二实训目标
熟练掌握MS培养基的配制及灭菌技术。
三实训材料
以下按小组(5人)为单位：烧杯、托盘天平、各培养基母液及激素溶液(见表1)，移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、小烧杯3个，蒸馏水， 1N盐酸，1N NaOH，pH试纸，纱手套，高压蒸汽灭菌锅，电炉。
四方法与步骤
1MS培养基的合成
按表1取大量元素母液(用量筒取)、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液、及相应激素(用移液管取)，加入烧杯中，并贴上标签。
按表1称取琼脂和蔗糖备用。
取3/1至1/2培养基体积(约150-250ml)蒸馏水至1000ml烧杯中，在电炉上加热，在温度升到60-70℃左右加入琼脂，并用玻璃棒不断搅拌，加热至沸腾，这时琼脂全部融化，透澈见底。从电炉上取下后，加入蔗糖、培养基母液及激素溶液(要用蒸馏水洗三次)，搅拌至均匀，定容至培养基体积(500ml)，然后用0.1N的NaOH或0.1N HCl调整pH值为5.8(也可用经验法直接加入酸或碱液调整 pH值)。
表1：培养基各成分称（量）取表
培养基 | 1 | 2 | |
名称 | 倍数或浓度 | 取量(ml) | 取量(ml) |
大量元素 | ×10 | 50 ml | 100 ml |
微量元素 | ×100 | 5 ml | 10 ml |
铁盐 | ×100 | 5 ml | 10 ml |
有机物 | ×100 | 5 ml | 10 ml |
琼脂 | 3.5g | 7g | |
蔗糖 | 15g | 30g | |
6-BA | 0.5mg/L | 5ml | |
NAA | 0.5 mg/L | 1ml | 0.2ml |
GA3 | 0.5 mg/L | 2ml | |
1.MS+6-BA5.0mg/L+NAA1.0 mg/L +GA32.0 mg/L +琼脂0.7%+蔗糖3% 500 ml
2.MS+NAA0.1 mg/L +琼脂0.7%+蔗糖3% 1000 ml
附计算方法：
A大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液取用量＝培养基体积÷倍数
如大量元素母液用量＝500 ml÷10=50 ml
B琼脂、蔗糖的称取量＝培养基体积×浓度
如琼脂的称取量＝500 ml×0.7%=3.5 ml＝3.5g
C激素的用量＝培养基体积×培养基激素浓度÷激素溶液浓度
如6-BA，欲配培养基为500 ml，培养基6-BA浓度为5.0 mg/L，6-BA溶液浓度为0.5 mg/L，则6-BA的用量＝500 ml×5.0 mg/L÷0.5 mg/L＝5 ml
2培养基的分装
搅拌均匀后，分装到培养瓶中，每瓶约25-30 ml，即1升培养基分装40-35瓶，最后用拧紧盖子，贴上标签(格式为：培养基简写名称 姓名 日期，如MS+NAA0.1 王浩 11.7.18)。
3培养基灭菌
将无菌水(每小组3瓶，每瓶装2/3体积蒸馏水)、无菌纸(A4纸对折，每包5张，用旧报纸包严)、培养基等放入高压蒸汽灭菌锅灭菌，121℃保持15-20分钟。等高压蒸汽灭菌锅压力降为0后，按仪器操作规程打开仪器，戴上纱手套取出培养基、无菌水及无菌纸，放在平台上让培养基凝固。
五训练要求
能正确计算培养基各成分的用量，掌握培养基制作的流程及技术，掌握培养基灭菌的温度及时间，能熟练操作高压蒸汽灭菌锅等仪器，掌握调整pH的方法。
六实训报告
写出实训报告，内容包括计算培养基各成分的用量、培养基制作的流程等。
七考核标准
能正确计算培养基各成分的用量 20分
能正确掌握培养基制作的技术20分
能贴标签，格式正确20分
能正确操作高压蒸汽灭菌锅20分
调整pH的方法正确10分
培养基凝固较好10分
