植物组培实验室基本仪器设备及常用化学试剂识别与保存

一实训内容

实训      植物组培实验室基本仪器设备及常用化学试剂识别与保存

二实训目标

认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备用途和使用方法，能熟练说出常用化学试剂名称及其保存方法。

三实训材料

组培实验室、内部各种设备如药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器、接种箱、超净工作台、各种高压消毒锅及相关说明书，植物组培中常用的化学试剂。

四实训步骤：

1．了解实验室的基本结构、作用及设置要求

A准备室（工作室）：

作用：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备：大型工作台、药品柜、普通冰箱、电子分析天平和托盘天平、电蒸馏水器、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉或电饭锅、酸度计、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

要求：安装水、电、排气等装置。

B洗涤室

作用：洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。

设备： 大型水槽、塑料筐，干燥架。

要求：上下水道要畅通，通风。

C消毒室

作用：用于已配制好的培养基、污染的培养瓶及其它需要的物质灭菌。

设备：高压灭菌锅。

要求：供电稳定。

D接种室：

作用：进行植物材料的分离接种及培养物转移.

设备： 1-2盏紫外线灭菌灯，一小型空调，接种箱、超净工作台

要求：一般7～8m²，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑。接种室要求干爽安静，清洁明亮。

E培养室：

作用：培养接种材料生长。

设备：培养架、空调机、加湿器、照明设备、定时开关钟。

要求：大小可根据需要培养架的大小、数目及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。周围墙壁要求有绝热防火的性能。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，宽度一般为1500px。

F驯化室

作用：放置需驯化的试管苗。

设备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、通风口以及必要的杀菌剂。

要求：清洁无菌。

G温室（培养大棚）。

作用：将驯化好的试管苗培养成苗。

设备:空调机、通风口、加湿器、恒温恒湿控制装置、喷雾装置、光照调节装置以及必要的杀菌杀虫装置及相应药剂。

要求：温度、光照、湿度、气体可控。

2．组培主要仪器设备用途

A称量仪器  

电子分析天平和托盘天平。电子分析天平，精确度为0.0001g，用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药品；托盘天平用于称取用量较大的糖和琼脂等，其精确度为0.1g。天平应放置在干燥、不受震动的天平操作台上。

B洗涤干燥设备  

烘箱，用于干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌和测定干物重。用于干燥需保持80～100℃；进行干热灭菌需保持150℃，达1～3h；若测定干物重，则温度应控制在80℃烘干至完全干燥为止。

C灭菌设备   

高压灭菌锅，用于进行培养基和器械用具的灭菌。常以电作能源。

D无菌接种设备

超净工作台：接种用。接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯对台面进行灭菌，接种时将紫外灯关闭。接种过程中用70%酒精反复擦拭台面。

E培养设备

培养架：长度因灯管长度而定，宽度一般为1500px左右。

空调机：保证室内温度，一般为25±2℃。应安置在室内较高的位置。

除湿机 保持培养室的湿度在70～80%。

恒温箱：用于植物材料的小规模培养，可以控制温度、湿度及光照等。

摇床与转床：用于改善液体培养材料的通气状况及促进酶解原生质体的解离。一般在液体培养中转速为每分钟100次左右，在解离原生质体时为每分钟80左右。

离心机：用于收集原生质体，转速要求较低。一般为1000～4000rpm即可。

F其它仪器设备

冰箱：主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。

显微镜及解剖镜：用于分离微茎尖可采用双筒实体解剖镜。用于材料观察多用显微镜。

水浴锅：用于溶解难溶药品和熔化琼脂条

磁力搅拌器：磁力搅拌器用于加速搅拌难溶的物质，如各种化学物质、琼脂粉等。磁力搅拌器还可加热，使之更利于溶解。

电蒸馏水器：生产蒸馏水。

酸度计:测定培养基pH值，可使用pH试纸进行粗测。

3．常用化学试剂及保存  

A大量元素类

KN0₃、NH₄NO₃ KH₂P0₄或NaH₂P0₄ 、KCl、CaCl₂.2H₂0 MgS0₄.7H₂0等，常温保存。

B微量元素类  

FeS0₄.7H₂0和Na₂-EDTA等，常温保存。

C有机物类   

蔗糖，葡萄糖和果糖麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖（常温保存）；VB_l(盐酸硫胺素)、VB₆(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、VC(抗坏血酸)、 生物素、叶酸、VB₂等；肌醇；甘氨酸，精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等（低温保存）。

D植物生长调节剂类    

生长素类（IAA，NAA，IBA），细胞分裂素类（６－BA，KT，ZT，TDZ等），赤霉素类（GA₃等）（低温保存）

E其它添加物类       

水解乳蛋白或水解酪蛋白（常温保存），椰乳，香蕉汁，马铃薯汁，酵母提取液，麦芽提取液(0．01％-0．5％)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等（现用现配）。 

F消毒剂类     

升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精（常温保存）。

五实训要求

能根据实际情况设计出植物组织培养实验室主要设备及布局；认识各种仪器、设备；认识常用的化学试剂及正确保存这些试剂。

六实训报告

写出实训报告，内容包括实验室设计及仪器设备配置；常用试剂及其保存方法。

七考核标准

能正确设计组培室各分室             20分

能正确配置组培室仪器、设备         40分

认识常用的化学试剂                 20分

能正确保存常用化学试剂             20分