实验方法原理
直到20世纪80年代中期，尚无技术可用于基因组DNA黏性大片段的分离、扩增和分析。在此之前，如果要对某一DNA片段进行详细的物理和功能研究，该 DNA 的长度应能够装入λ噬菌体颗粒或黏粒载体。
二、实验材料
酿酒酵母
三、试剂、试剂盒
甘油
四、仪器、耗材
脉冲场凝胶电泳仪、选择性培养基、 YPD琼脂平板、 YPD培养基、 试管
五、实验步骤
1、材料
1）缓冲液和溶液
用 YPD 培养基配制的 30% (V/V)的甘油
2）凝胶
脉冲场凝胶电泳仪
3）培养基
选择性培养基
YPD 琼脂平板
YPD 培养基
4）专用设备
试管（2 ml )
5）载体和酵母菌株
携带重组 YAC 克隆的酿酒酵母
2、方法
1）实验室获得克隆后，立即划线接种于选择培养基中，30℃ 培养 48 h 以获得单个菌落。
2）挑取 6~12 个单菌落，分别加入 10ml YPD 培养基中。将培养物在 30℃ 剧烈振荡 (300 r/min ) 培养过夜。在此期间，细菌数应达到饱和（OD600=2.0~3.0，约为 3 X 107 个细胞/ml)。
3）分别从每一培养物中取 9 ml，提取酵母DNA。
4）用 PFGE 分析每一个 DNA 产物中 YAC 的大小。
5）用 Southern 杂交或 PCR 确定 YAC DNA 中存在靶序列。
6）如果结果满意，即培养液中含有的 YAC 大小相同，没有不稳定或重排的迹象，并且靶序列也存在，则可以选择 1~2 个培养物长期保存。
注意：
酵母培养物可以在含15%（V/V）甘油的生长培养基中-70℃下无期限保存（Well and Steart 1973）。如果要保存：
1、 准备一个2mL试管，管内有0.5mL无菌的、用YPD培养基配制的30%（V/V）甘油
2、 加入0.5mL酵母培养物，轻轻振荡试管混匀内容物。
3、 将试管放入-70℃的环境，将一小份冷冻储存物涂布在YPD琼脂平板上即可复苏酵母菌（若保存温度高于-55℃，酵母菌将失去活力）
