质粒扩增及提纯
实验步骤：
一、准备工作
1. 配液体LB 蛋白胨10g，酵母7.5g，NaCl15g，去离子水定容至1000ml（如果嫌多，根据样品可以按比例减少）
2. 配CaCl2：4.44CaCl2+500ml去离子水
3. 固体培养基：蛋白胨1g，酵母0.5g，NaCl1g，琼脂1g，去离子水定容至100ml
4. 配抗生素（因质粒而异）：
Ampicillin：工作液 100μg/ml ,可以先配成 100μg/μl ,用时1:1000
Kanamycin：工作液 25μg/ml ,可以先配成 25μg/μl ,用时1:1000
5. 玻璃珠（或者接种环，有啥用啥）、一套枪头、玻璃培养皿（没有玻璃的，塑料的也行）、离心管、EP管
二、实验步骤
1. 将大肠杆菌加到3-4mlLB培养基中，37℃，150-200r，18-24h；摇过的菌：LB=1：100~1：300，37℃，110r，3h（菌第一次摇过之后浑浊；再摇是为了让菌液处于对数期）；
2. 高压固体培养基（灭菌），高压结束冷却到50~60℃（受能忍受就行，温度太低的话，没倒完就凝了）拿出来加入抗生素（按说明书来）倒入培养皿中（在超净台中）；
3. 取出摇好活化的菌，取1~1.5ml加入EP管中，4℃，1000r，1min；
4. 用枪头吸出培养基（就是3中的在液体LB中培养的菌），加入200μl预冷过的4℃CaCl2 ，吹打混匀，分装 50μl 一管，制备感受态。
5. 把分装出的 EP 管在冰上静置 20min ，加入质粒 50~100ng，再冰上静置 20min ， 热激42℃，90s （务必精准迅速），插回冰上，静置 10min 。（热激是为了打开孔道，让质粒进入，插回冰上是为了关闭孔道，让质粒出不来）；
6. 加入无抗生素 LB 每管 500μl ， 37℃ 慢摇（ 80r ），1h（转进去质粒的细菌表达出抗性蛋白，使细菌耐对应的抗生素）；
7. 涂板（玻璃珠滚也行，接种环划也行，不要太多，不然长出来菌太茂盛）。倒置平板， 37℃ 孵箱过夜；
注：同时要有空白对照（只有加了抗生素的培养基）和阴性对照（加了菌种）。如果第二天空白对照和阴性对照长了菌，做不下去了，污染了或者是抗生素不好使。样品没长出来菌，也做不下去了，要么是抗生素加多了，要么是质粒没进去。
8. 取出平皿，观察菌落是否生长，4℃倒置放。将抗生素按说明书浓度加入LB培养基中，3~4ml，挑出菌落（单个菌落，所以7不要太多，不然找不到单个的），连枪头一起打入。37℃ ，剧烈摇 150r 过夜。
9. 质粒小提（小提别把菌液都用了）用的试剂盒，看说明书。然后跑电泳，看质粒质量（琼脂糖凝胶电泳）
10.制备琼脂糖凝胶：选择足够点样口数量的塑料胶槽。（点样孔数量=的样品数量× 2+marke，因为要对比一下提出来的样品和原样品是否是一样的东西），配制 1×TAE／TBE电泳缓冲液放于三角烧瓶中，1g琼脂糖粉+50ml 1×TAE／TBE （1%-2% 均可）
微波炉大概冒泡泡三次就可以。控制火候，避免溢出。冷却至60℃左右后，按EB终结者的说明书加进去。迅速插上合适大小的梳子，以形成点样孔。待凝胶完全凝固后（约半小时以上），小心拔出梳子。将凝胶安放到电泳槽内。
点样：上样前预电泳3-5 min 。核酸样品与上样缓冲液混合后，点样，先加入 Marker 。6×loading的话就可以：1μl loading，3μl去离子水，2μl核酸样品
电泳：加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60-100V，样品由负极（黑色）向正极（红色）方向移动。电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低，当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 25px处时，停止电泳。
电泳后的凝胶照相：将染色后的凝胶置于紫外灯下进行照相。摄影用的紫外模式。选择合适曝光时间，一般为5秒左右。
大致分子量位置相同，成功。拿着剩下的菌液继续摇菌
11.大提 按说明书走，提完电泳，测OD值。
