基于金纳米颗粒信号放大效应电化学检测 DNA 聚合酶
1、金电极的预处理及修饰:先将金电极浸入Piranha溶液[V(双氧水)∶V(浓硫酸)=1∶3]中浸泡30min,然后用大量超纯水冲洗.依次用粒径分别为1.0,0.3和0.05μm Al2O3粉末在麂皮上抛光至镜面。将打磨好的电极分别用超纯水、乙醇和超纯水各超声清洗5min,以除去电极表面附着的杂质。最后,将金电极浸入0.1mol/L H2SO4溶液中,在-0.2~1.6V之间进行循环伏安扫描,直至获得稳定的循环伏安峰。将扫描好的电极用超纯水清洗后,用氮气吹干保存待用。
金电极的DNA引物片段修饰:将15μL 0.5μmol/L巯基修饰的引物DNA片段滴加在金电极上,室温下反应2h后,将电极浸入含1mmol/L MCH的PBS溶液(0.1mol/L,pH=7.4)中,室温下封闭10min,用PBS溶液清洗,获得DNA引物片段修饰的金电极。将15μL 2.5μmol/L的模板DNA链滴加到电极上,与DNA引物链杂交2h后,再加入15μL AuNPs-DNA到电极上与模板DNA链杂交2h,反应完毕用PBS溶液清洗,即得DNA引物/模板DNA链/AuNPs-DNA“三明治”结构修饰的金电极。
2、KF-聚合酶活性的检测:配制200μL含有50mmol/L Tris-HCl(pH=8.0),5mmol/LMgCl2和50μmol/L dNTP的KF-聚合酶反应溶液,加入不同浓度的KF-聚合酶。取10μL含不同浓度的KF-聚合酶反应液滴加到已修饰好的电极表面,反应2h,经缓冲溶液清洗后测定其电化学信号。本文采用电化学交流阻抗(EIS)法,在含有10mmol/L[Fe(CN)6]4-/3-和0.1mol/L KCl的PBS溶液(0.1mol/L)中对电极的修饰过程进行表征,采用计时电量(CC)法在含有50μmol/L RuHex的Tris-HCl(10mmol/L)缓冲溶液中进行电化学信号的测量。
https://www.360kuai.com/pc/9f259d962c49bc9f0?cota=3&kuai_so=1&sign=360_7bc3b157&refer_scene=so_55
简介目前乙肝药物设计原理,阻断DNA聚合酶,并导致链终止