基因组DNA的提取与纯化
一、材料：银杏等木本植物。
二、主要试剂
CTAB抽提液:1g CTAB，5ml 1M Tris, 2ml 500mM EDTA，4.1g NaCl定容至50ml。(2% CTAB，0.1MTris，20mM EDTA，I.4MNaCl，pH8. 0)
CTAB/NaCl: 10g CTAB,4.1g NaCl,溶解后定容至100ml。(10% TAB, 0. 7M NaCl)
TE/NaCl: 0.5ml 1M Tris，10μL 500mMEDTA，2.9gNaCl定容至50ml。(10mMTris,0.1mM EDTA，1M NaCl，pH8.0)。
Rnase :溶于10mMTris.Cl (pH7.5)，15mM NaCl溶液中，配成10mg/ml浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，添加等体积甘油后贮于-20℃。
3 mol/L NaAc(pH 5.2)，氯仿:异戍醇(24:1)。β-巯基乙醇，氯仿，异丙醇，异戊醇，饱和酚，无水乙醇，不溶性PVP等。
三、实验步骤
①吸取8mlCTAB 抽提液，加入320μL β-巯基乙醇，混匀，预热至65℃;
②称取0.5克叶片，置于事先用液氮预冷的研钵中，快速加入适量不溶性PVP，加入液氮研磨成粉未；
③迅速将粉未倒入至CTAB抽提液中，摇匀，65℃保温1h,期间每隔5min摇匀一次;
④加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，颠倒数次，10000rpm离心5min;
⑤将上清液转入另一无菌离心管中，加入1/10体积CTAB/NaCl、等体积氯仿/异戊醇，颠倒混匀，1000rpm离心10min;
⑥将上清液转入一无菌离心管中，加入2/3体积异丙醇，颠倒混匀，置于-20℃冰箱中一小时，然后10000rpm离心10min;
⑦弃掉上清液，加入TE/NaCl缓冲液溶解沉淀，10000rpm离心;
⑧上清液转入一个1.5mL无菌离心管中，加入1/10体积NaAc及2/3体积异丙醇，颠倒混匀，此时会出现絮状沉淀，钩出此沉淀，在70%乙醇中漂洗数次，用无菌滤纸上吸干，溶于含Rnase浓度为10μg/mL的0.5mL TE缓冲液中，37℃处理半小时，加入等体积的酚/氯仿(体积比为1:1)，轻轻混匀，室温下静置10min,12000rpm离心1 min,上清液转入新离心管中，加入1/10体积的3 mol/L NaAc (pH5.2)和二倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，此时已出现DNA絮状物, - 20℃ 放置30min以上，用玻璃棒钩出DNA絮团，在70%乙醇中漂洗，无菌滤纸上吸干，溶解于0. 5mL TE缓冲液中，-2 0℃保存。
电泳分析：取2μL DNA样品在0.7%琼脂糖凝胶上电泳，溴化乙锭染色，紫外灯上观察和拍照。
