蛋白质分离技术(2学时)
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同学们,
这一讲的内容是蛋白质组的分离技术,对应的教材内容为:2.1.2蛋白质分离技术(P15-25);3.3 一维等电聚焦电泳(P50-57);3.4二维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(P58-73)。
如何从众多的蛋白质中找到目标蛋白不是一件容易的事。我们上一讲把蛋白质组提取比喻成“竭泽而渔”,这一讲蛋白质分离可以比喻成“鱼的分拣”工作。渔夫可以会将鱼摊在甲板上,目测分拣 ;也可以通过自动分拣机操作。这正好对应上我们接下来要讲的两个主要的分离技术:电泳和色谱。电泳技术手动操作占比大,色谱技术可实现自动化。
凝胶电泳是通过谱图的方式来展示所提取出来的蛋白质组,下面我们先来学习简单的一维凝胶电泳(SDS-PAGE)在蛋白质组中的应用,以及二维凝胶电泳中的第一维“传统IEF”的技术要点。
为了克服传统IEF技术缺点,人们发展出了固相pH梯度技术,下面我们一起来了解这一技术中IPG胶条的特点。
IPG胶条的水化及上样过程,同学们可以复制下面的视频链接来了解:
http://v.youku.com/v_show/id_XNzYyMjU1Mjg0.html?from=y1.2-1-87.3.2-1.1-1-1-1-0
双向凝胶电泳技术有哪些缺陷?如何改进呢?
色谱技术也是分离蛋白质的有效手段,在很多液质联用仪上都有应用。毛细管电泳虽名为电泳,但大部分毛细管电泳是无凝胶的。下面我们一起来了解一下吧。

