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第一节 体外抗原抗体反应的特点及影响因素
一、抗原或抗体结合反应的特点
(一)特异性
一种抗原通常只能与其刺激机体产生的抗体结合,称为抗原抗体结合的特异性。抗原与抗体的结合具有高度的特异性,这种特异性是由抗原表位与抗体分子中的超变区的互补结合所决定的。利用这一特点,在体外可以对许多未知的生物学物质进行特异性鉴定。例如白喉抗毒素只能与相应的白喉外毒素相结合,而不能与破伤风外毒素结合。
(二)可逆性
抗原与抗体结合是分子表面化学基团的非共价结合。这种以非共价结合形成的抗原抗体复合物不稳定,降低溶液的pH或者提高溶液离子强度可使抗原抗体复合物解离,即抗原抗体反应具有可逆性。因此在体外进行抗原抗体反应时,要求具有适当的温度、酸碱度和离子强度。
(三)可见性
抗原和抗体结合后是否出现肉眼可见的反应取决于二者的浓度和比例。若二者比例恰当时,形成明显的肉眼可见的反应物。若二者比例不适当,抗体过剩或抗原过剩所形成的复合物太小,肉眼不易观察,出现假阴性现象。因此,在具体的实验过程中要适当稀释抗原或抗体,以调整两者浓度和比例,使其出现最大复合物,避免假阴性的发生。
(四)阶段性
抗原抗体反应分为两个阶段,第一阶段是抗原和抗体特异性结合阶段,此阶段发生迅速,在数秒钟至几分钟内即可完成,一般不出现肉眼可见的反应;第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段,是小的抗原抗体复合物之间靠正负电荷吸引形成较大复合物的过程。此阶段所需时间从数分钟、数小时到数日不等。且易受电解质、温度和酸碱度等条件的影响。
二、抗原抗体反应的影响因素
(一)电解质
抗原、抗体通常为蛋白质,等电点分别为pH3~5和pH5~6不等,在中性或弱碱性条件下,表面带有较多的负电荷。适当浓度的电解质会让抗原和抗体失去一部分负电荷而互相结合,出现可见的凝集反应,若无电解质,则不出现凝集。
(二)温度
在一定的温度范围内,提高温度可增加抗原与抗体分子碰撞结合的机会,加速可见反应的出现,但温度过高可使抗原或抗体变性失活,影响实验结果。通常抗原抗体反应的最适温度是37℃。
(三)酸碱度
抗原抗体反应的最适pH在6~8 之间, pH过高或过低都会影响抗原和抗体分子的理化性质,从而影响实验的可靠性。此外,当抗原抗体反应液的pH接近抗原或抗体的等电点时,抗原抗体所带正、负电荷相等,由于自身吸引而出现凝集,导致非特异性反应,即假阳性反应。

