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讲稿


体内样品的制备与贮藏

一、体内样品的种类

体内样品包括各种体液与组织。但是,在体内药物分子中最为常用的样本是血液,它能较为准确地反应药物在体内的状况。尿液中含有丰富的药物代谢物,也被较多地使用。唾液因采集便利且有时与血浆游离药物浓度具有相关性而时有使用。而脏器组织,除非特别需要,在治疗药物监测(TDM)中很少使用。

二、体内样品的采集与制备

(一)血样

血样包括全血(whole blood)血浆(plasma)和血清(serum),是最为常用的体内样品。血药浓度检测,除非特别说明外,通常指血浆或血清的药物浓度测定。当药物在体内达到稳态状态时,血浆中药物浓度能够反应药物在靶器官的状况,因而血浆药物浓度可作为体内药物浓度的可靠指标。

1.全血的采集  人体采血,通常采集静脉血,有时从毛细血管采血(成人多从手指或耳垂取血,小儿多从脚趾取血)用于临床化验。根据分析方法灵敏度的要求,一般每次采血量1~5ml;动物实验时,可直接从动脉或心脏取血。全血采集后,置含有抗凝剂(肝素、EDTA、枸橼酸盐、草酸盐等)的试管中,混合均匀,但不经离心操作,保持血浆和血细胞处于均相,即为全血样品。

2.血浆的制备  将采集的全血置含有抗凝剂的试管中,混匀后,以约1000´g离心力,离心5~10分钟,促进血红细胞沉降分离,所得淡黄色上清液即为血浆。最常用的抗凝剂是肝素(heparin)。肝素是体内正常生理成分,因此不致改变血样的化学组成或引起药物的变化,一般不会干扰药物的测定。

3. 血清的制备  采集的全血不加抗凝剂,室温放置至少30分钟~1小时,待血液凝固后,以约1000´g离心力,离心10~20分钟,上层淡黄色澄清液体即为血清。

在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原。因药物与纤维蛋白几乎不结合,所以血浆与血清中的药物浓度通常是相同的。作为血药浓度测定的样品,血浆和血清可任意选用。但无论是采用血浆还是血清,现有的文献、资料所列的血药浓度,均系指血浆或血清中药物的总浓度(游离+与血浆蛋白结合)。

血浆比血清分离得快,而且制取的量约为全血的50%~60%(血清只为全血的20%~40%),多数研究者使用血浆。若血浆中含有的抗凝剂对药物浓度测定有影响时,则应使用血清样品。

若需专门测定平均分布于血细胞内、外的药物浓度,则应使用全血样品;某些情况下由于血浆内药物浓度波动太大,且又难以控制,或因血浆药物浓度很低而影响测定,也应考虑使用全血样品。如:氯噻酮可与红细胞结合,在血细胞中的药物浓度比血浆中药物浓度大50~100倍,且其动力学行为亦与在血浆中不同,因此宜用全血样品测定。

(二)尿样

体内药物清除主要通过肾脏排泄,经尿液排出。尿药测定主要用于药物的剂量回收、尿清除率研究。同时,当药物在血中浓度过低难以准确测定时,尿药测定亦用于药物制剂的生物利用度研究,以及根据药物剂量回收研究可以预测药物的代谢过程及测定药物的代谢类型等。

尿样包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。健康人排出的尿液是淡黄色或黄褐色的,pH在4.8~8.0之间。放置后会析出盐类,并有细菌繁殖、固体成分的崩解使尿液变混浊。因此,尿液采集后如不能立即测定,需低温冰冻保存或加入防腐剂后冷藏保存。常用的防腐剂有二甲苯、三氯甲烷、醋酸、盐酸等。保存时间为24~36小时,可置冰箱(4℃)中;长时间保存时,应冰冻(−20℃或−80~−70℃)。

体内药物的清除可能以原形(母体药物)或代谢物及其缀合物等形式排出。尿液中药物浓度大都较高,收集量可以很大(成人一日排尿量为1~5L)。但由于易受食物种类、饮水多少、排汗情况等影响,常使尿药浓度变化较大,故测定尿液中药物浓度时,一般采用时间尿(一定时间区间的尿液),以某一时间段或单位时间内尿中药物的总量(排泄量或排泄率)表示。

测定尿液中药物的总量时,应收集服药后一定时间内(如24小时)各时间段排泄的全部尿液,记录体积;量取一部分测定尿液药物浓度,乘以尿液量,计算尿药排泄总量。

(三)唾液

一些药物的唾液浓度与血浆游离浓度呈现密切相关,因此在TDM工作中有可能利用测定唾液中药物浓度进行临床监测。另外,唾液样品也可用于药物动力学的研究。

唾液是由腮腺、舌下腺和颌下腺三个主要的唾液腺分泌汇集而成的混合液体。正常成年人唾液分泌量每天约为1~1.5L。唾液的pH为6.2~7.4,当分泌增加时,pH会更高。

唾液的采集一般在漱口后约15分钟进行,应尽可能在刺激少的安静状态下收集口腔内自然流出的唾液。唾液样品采集后,应立即测量其除去泡沫部分的体积。放置后分成泡沫部分、透明部分及乳白色沉淀部分三层。以3000 r/min离心10分钟,取上清液作为药物浓度测定的样品。

唾液应在4℃以下保存,冷冻保存唾液时,解冻后有必要将容器内唾液充分搅匀后再用,否则测定结果会产生误差。

(四)组织

在药物的动物试验及临床上由于过量服用药物而引起的中毒死亡时,药物在脏器组织中的分布情况可为药物的体内动力学过程提供重要信息。常用的脏器组织有:胃、肝、肾、肺、心、脑等脏器及其他组织。

体内各种脏器组织样品在测定之前,首先需均匀化制成水性基质匀浆溶液,然后再用适当方法萃取药物。匀浆化操作系将组织样品中加入一定量的水或缓冲液,在刀片式匀浆机中匀浆,使待测药物释放、溶解,分取上清液测定。




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