友情提示:同学您好,此页面仅供预览,在此页面学习不会被统计哦! 请进入学习空间后选择课程学习。
讲稿



检查药物中存在的微量杂质,首要的问题就是要选择一个专属性强的方法,使药物对其所含微量杂质的检测也不产生干扰。所以药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理性质或化学性质上的差异来进行。药物与杂质在物理性质上的差异,主要指药物与杂质在外观性状、化学反应特性、分配或吸附以及对光的吸收等性质的差别。

有机杂质在药品质量标准中的项目一般采用如下方法命名:

1.以杂质的化学名称作为项目名称  当杂质是已知化合物时(特定杂质),就以该化合物的化学名称作为质量标准中的项目名称;例如卡比马唑及其片剂中的甲巯咪唑,阿司匹林中的游离水杨酸。如果杂质无通用的简称,可选用适宜的简称,如肾上腺素中的“酮体”。如果杂质亦无相应的简称,可使用“杂质A”、“杂质B”或“杂质Ⅰ”、“杂质Ⅱ”等作为特定检查的项目名称。

2.以某类杂质的总称作为项目名称  当杂质不能明确为单一物质而又为某一类物质时,则以这类物质的总称作为项目名称

杂质限量的确定要合理,在确保用药安全有效的前提下,应考虑到生产的可行性及批与批之间的正常波动,还要考虑药品本身的稳定性。杂质限度的制订应考虑如下因素:杂质及含一定限量杂质的药品的毒理学研究结果;给药途径;每日剂量;治疗周期;给药人群;杂质药理学可能的研究结果;原料药的来源;在保证安全有效的前提下,药品生产企业对生产高质量药品所需成本和消费者对药品价格的承受力等。原料药与制剂的杂质限度如表:                            


杂质检查常用方法包括:化学方法、色谱方法、光谱方法和物理方法等。 

(一)化学方法

当药物中杂质与药物的化学性质相差较大时,可选择合适的试剂,使之与杂质发生化学反应, 产生颜色、沉淀或气体,从而检查杂质的限量。采用化学检查法除了对杂质进行半定量检查外,还可采用滴定法和重量法对杂质进行定量测定。

例如,氯硝柳胺药品标准中有生产原料2-氯-4-硝基苯胺和5-氯水杨酸的检查, 5-氯水杨酸可以与三氯化铁试液反应生成紫色配位化合物。采用灵敏度法进行检查。方法:取本品0.50g,加水10ml,煮沸2分钟,放冷,滤过,滤液加三氯化铁试液数滴,不得显红色或紫色。2-氯-4-硝基苯胺分子结构含有芳伯氨基,可以发生重氮化-偶合反应而呈色。采用对照法检查。方法:取本品0.10g,加甲醇20ml,煮沸2分钟,放冷,加盐酸溶液(9→100)使成50ml,滤过,取滤液10ml,加亚硝酸钠试液5滴,放置10分钟,加2%氨基磺酸铵溶液1ml,振摇,再放置10分钟,加0.5%二盐酸萘基乙二胺溶液1ml,如显色,与2-氯-4-硝基苯胺10μg,加甲醇4ml与盐酸溶液(9→100)使成10ml溶液,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.05%)。偶合试剂二盐酸萘基乙二胺遇亚硝酸也能显色,干扰颜色的比较,所以在重氮化后加入氨基磺酸铵,将剩余的亚硝酸分解除去,再加入偶合试剂。

(二)高效液相色谱法

药物中的有关物质包括起始原料、中间体、副产物、异构体、聚合体和降解产物等,它们的化学结构常常与药物类似或具有渊源关系。色谱法是有关物质检查的首选方法。高效液相色谱法分离效能高、专属性强和检测灵敏好,可以准确地测定各组分的峰面积,是杂质检查的首选方法。采用高效液相色谱法检查杂质,有四种方法:外标法(杂质对照品法)、加校正因子的主成分自身对照测定法、不加校正因子的主成分自身对照法、面积归一化法。

(1)外标法(杂质对照品法):适用于有杂质对照品,而且进样量能够精确控制(以定量环或自动进样器进样)的情况。方法是配制杂质对照品溶液和供试品溶液,分别取一定量注入色谱仪,测定杂质对照品溶液和供试品溶液中杂质峰的响应,按外标法计算杂质的浓度。外标法定量比较准确,但它必须使用杂质对照品,而杂质对照品的供应相对来讲是比较困难的。

例如,卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查:在合成和贮存过程中卡托普利易氧化为二硫化物,ChP采用外标法检查。用流动相制备供试品溶液的浓度为0.5mg/ml,卡托普利二硫化物对照品溶液的浓度为5μg/ml,HPLC测定,供试品溶液的色谱图中如有与卡托普利二硫化物对照品保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算。原料药中的二硫化物的含量不得过1.0%,片剂中的不得过卡托普利标示量的3.0%。

(2)加校正因子的主成分自身对照法:该法仅适用于已知杂质的控制。以主成分为对照,用杂质对照品测定杂质的校正因子。杂质的校正因子和相对保留时间直接载入各品种质量标准中。在常规检验时,通常以主成分为参照,用相对保留时间定位,杂质的校正因子用于校正该杂质的实测峰面积。方法是将杂质对照品和药物对照品配制成一定浓度的测定杂质校正因子的溶液,进行色谱分离、分析后,按内标法求出杂质相对于主成分的校正因子(f  )


式中,AS为药物对照品的峰面积;AR为杂质对照品的峰面积;CS为药物对照品的浓度;CR为杂质对照品的浓度。

测定杂质含量时,将供试品溶液稀释成与杂质限量相当的溶液作为对照溶液,进样,调节检测灵敏度(信噪比合格)或进样量(不得过载),使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%~25%或其峰面积满足杂质限量测定要求。然后,取供试品溶液和对照溶液 ,分别进样,除另有规定外,供试品溶液的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍。测量供试品溶液色谱图中各杂质的峰面积,分别乘以相应的校正因子后,与对照溶液 主成分的峰面积比较,计算杂质含量。


式中,AX为供试品溶液杂质的峰面积;AS′为对照溶液药物主成分的峰面积;CX为杂质的浓度;CS′为对照溶液中药物的浓度。

本法的优点是既省去了杂质对照品,而又考虑到了杂质与主成分响应因子的不同所引起的测定误差,准确度较好。缺点是在日常检验时,如果没有杂质对照品,杂质的定位必须采用相对保留时间,所以杂质相对于药物的相对保留时间也需一并载入各品种项下。

例如,红霉素A是红霉素的主要活性物质,红霉素B和红霉素C是红霉素的杂质,其中红霉素C是主要杂质,毒性比红霉素A大2倍,活性仅为红霉素A的20%,中国药典采用此法检查红霉素B、红霉素C组分及有关物质。用pH7.0磷酸盐缓冲溶液-甲醇(15:1)为溶剂,制备浓度为4mg/ml的供试品溶液;将供试品溶液定量稀释制成浓度为0.2mg/ml的溶液作为对照溶液。HPLC测定,记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍。红霉素B和红霉素C按校正后的峰面积计算(分别乘以校正因子0.7、1.0),均不得大于对照溶液主峰面积(5.0%)。红霉素烯醇醚、杂质1按校正后的峰面积计算(分别乘以校正因子0.09、0.15)和其他单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍(3.0%);其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(5.0%),供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.01倍的峰可忽略不计。

(3)不加校正因子的主成分自身对照法:适用于没有杂质对照品的情况。方法是将供试品溶液稀释成与杂质限量相当的溶液作为对照溶液,调节检测灵敏度后,取供试品溶液和对照溶液,分别进样,除另有规定外,供试品溶液的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍,测量供试品溶液色谱中各杂质的峰面积,并与对照溶液主成分的峰面积比较,计算杂质含量。

例如,利巴韦林中有关物质的检查:取本品,用流动相配制成浓度分别为0.4 mg/ml和4mg/ml的溶液作为供试品溶液和对照液;采用HPLC法,分别进样记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍(0.25%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)。

该方法多在单一杂质含量较少、无法得到杂质对照品、杂质结构(吸收情况)与主成分相似,即杂质与主成分的响应因子基本相同的情况下适用。当已知杂质,特别是毒性杂质对主成分的相对相应因子在0.9~1.1范围内时,可以用本法计算含量;超过0.9~1.1范围内时,宜用加校正因子的主成分自身对照法或对照品对照法计算含量。

(4)面积归一化法:通常只适用于供试品中结构相似、相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量的粗略考查。如异构体相对含量的检查。该法简便快捷,但在杂质结构与主成分结构相差较大时可能会有较大的定量误差。因此,药典对本法的使用作了明确的限定,除另有规定外,一般不宜用于微量杂质的检查。

(三)薄层色谱法

薄层色谱法操作简便,分离效能高,并有多种检出方法。广泛应用于杂质(有关物质)的检查。常用以下几种方法:

1.杂质对照品法  制备一定浓度的供试品溶液和相应的(浓度符合限度规定的)杂质对照品溶液或系列杂质对照品溶液,点样、展开、检测并比较。供试品溶液色谱图中除主斑点外的其他斑点(杂质斑点)与相应的杂质对照品溶液或系列杂质对照品溶液色谱图中的主斑点比较,颜色不得更深。

2.自身稀释对照法  制备一定浓度的供试品溶液;取供试品溶液一定量,按照限度规定,稀释制成另一低浓度溶液或系列溶液,作为对照溶液,点样、展开、检测并比较。供试品溶液色谱图中除主斑点外的其他斑点(杂质斑点)与相应的自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液色谱图中的主斑点比较,颜色不得更深。如盐酸氯丙嗪中有关物质的检查:取供试品,加甲醇制成每1ml中含10mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,加甲醇稀释成每1ml中含0.1mg的溶液,作为对照溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以环己烷-丙酮-二乙胺(80׃10׃10)为展开剂,展开、晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点,与对照溶液所显的主斑点比较,不得更深。

3.其他方法  除上述两种方法外,也可将杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用。即特定杂质限度采用杂质对照品法,其他杂质限度采用供试品溶液自身稀释对照法控制。

友情提示:同学您好,此页面仅供预览,在此页面学习不会被统计哦! 请进入学习空间后选择课程学习。
课件与视频






友情提示:同学您好,此页面仅供预览,在此页面学习不会被统计哦! 请进入学习空间后选择课程学习。
知识点拓展图



友情提示:同学您好,此页面仅供预览,在此页面学习不会被统计哦! 请进入学习空间后选择课程学习。
作业题


友情提示:同学您好,此页面仅供预览,在此页面学习不会被统计哦! 请进入学习空间后选择课程学习。
参考资料