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讲稿


 


分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度,对该物质进行定性、定量分析的方法。物质吸收紫外(200~400nm)和可见光区(400~760nm)的电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。利用紫外-可见吸收光谱进行定性和定量分析的方法,称为紫外-可见分光光度法。紫外-可见分光光度法可用于药物的鉴别、检查和含量测定,是药品检验中应用非常广泛的一类仪器分析方法。

紫外光谱法用于药物的鉴别的原理是:同一物质在相同的条件下,测得的紫外-可见吸收光谱应具有完全相同的特征性,据此进行药物的鉴别,《中国药典》常采用方法如下:

1.核对吸收光谱的特征参数

即核对供试品溶液的最大吸收波长()、吸收系数()、吸光度(A)是否符合规定。当供试品具有不止一个吸收峰时,可同时用几个峰位作为鉴别依据。光谱的肩峰或吸收谷,有时也与峰值同用。例如《中国药典》中乙胺嘧啶的鉴别,要求供试品溶液在272nm处有最大吸收,在216nm处有最小吸收;盐酸氯丙嗪的鉴别采用盐酸溶液(9→1000)配制5μg/ml供试品溶液,要求在254nm和306nm处有最大吸收,且306nm波长处的吸光度约为0.46。贝诺酯的鉴别则要求供试品的无水乙醇溶液在240nm波长处有最大吸收,且    为730~760(按干燥品计)。

2.比较吸光度比值

物质的吸收峰较多时,可规定几个波长处的吸光度比值作为鉴别依据。如两性霉素B的鉴别,规定在362nm±2nm、381nm±2nm与405nm±2nm波长处有最大吸收,且362nm与381nm处的吸光度比值约为0.6,381nm与405nm处的吸光度比值约为0.9。

3.比较吸收光谱

采用的方法是分别测定供试品溶液和对照品溶液在一定波长范围内的吸收光谱,要求二者的吸收光谱应一致。或经化学处理后,测定其反应产物的吸收光谱特性。为了增加以上鉴别方法的专属性,上述方法可以单独使用,也可几个结合起来使用。

例如,盐酸布比卡因的UV鉴别:取本品适量,精密称定,按干燥品计算,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释,制成每1ml中约含0.40mg的溶液,在263nm与271nm的波长处有最大吸收;其吸光度分别为0.53~0.58与0.43~0.48。

地蒽酚的UV鉴别:取含量测定项下的溶液,于240nm~400nm的波长范围内测定吸光度,在257nm、289nm与356nm的波长处有最大吸收。在257nm与289nm处的吸光度比值应为1.06~1.10;在356nm与289nm处的吸光度比值应为0.90~0.94。

氯贝丁酯的UV鉴别:取本品,加无水乙醇制成每1ml中含0.10mg的溶液(1)与每1ml中含10mg的溶液(2),溶液(2)在226nm的波长处有最大吸收;溶液(1)在280nm与288nm的波长处有最大吸收。

USP采用紫外光谱进行药物鉴别,多采用对照品法,即将待鉴别的样品与对照品按同法处理,在200~400nm波长范围内扫描两溶液,要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数,或吸收比在规定的限度内。

例如,USP32中阿替洛尔的UV鉴别:本品50mg/ml甲醇溶液显示的紫外光谱图与同样条件下测得的USP阿替洛尔对照品的紫外光谱图一致。呋塞米的UV鉴别:本品8mg/ml的0.02mol/L氢氧化钠溶液,在271nm处的吸收系数,按干燥品计,与USP呋塞米对照品的吸收系数相差不得超过3.0%。

JP利用紫外光谱法进行药物鉴别时,大部分品种均采用与标准图谱特征比对的方法进行。例如,JP15中5-氟胞嘧啶的UV鉴别:取本品的0.1mol/L盐酸溶液(1→125 000),照分光光度法测定,所得光谱与标准光谱比较,在相同的波长处应有一致的吸收。

BP的方法与中国药典类似,通过测定紫外光谱的特征参数,与标准规定进行比较。例如,BP2009中盐酸吗啡的UV鉴别:取本品25mg,加水溶解并稀释成25.0ml,作为供试品溶液A。取供试品溶液A 10.0ml,加水稀释成100.0ml的溶液,作为供试品溶液1,于250~350nm波长范围内测定,溶液显示在285nm处有一最大吸收峰,其吸收系数应为37~43。另取供试品溶液A 10.0ml,加0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释成100.0ml的溶液,作为供试品溶液2,在250~350nm波长范围内测定,溶液显示在298 nm处有一最大吸收峰,其吸收系数应为64~72。

又如,BP2009中阿替洛尔的UV鉴别:取本品0.100g用甲醇溶解并稀释至100ml,取上述溶液10.0ml用甲醇稀释至100ml。在230~350nm波长范围内测定,溶液显示在275nm和282nm处有最大吸收峰,其吸收度比值为1.15~1.20。


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